| 细胞名称: | hCMEC/D3细胞, hCMECD3细胞, 永生化人脑微血管内皮细胞 |
|---|---|
| 细胞又名: | HCMEC/D3; CMEC/D3 |
| 细胞来源: | Millipore |
| 产品货号: | SCC066 |
| 种属来源: | 人 |
| 组织来源: | 脑 |
| 患者性别: | 女 |
| 细胞形态: | 上皮细胞样 |
| 生长特性: | 贴壁生长 |
| 培养基: | RPMI-1640，90%；FBS，10% 。 |
| 生长条件: | 气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃, |
| 传代方法: | 1：3至1:6，每周2次。 |
| 冻存条件: | 95% 培养基+5% DMSO，液氮储存 |
| STR: |
Amelogenin X
CSF1PO 10,12
D3S1358 16,17
D5S818 11
D7S820 10,12
D8S1179 15,16
D13S317 11,14
D16S539 9,12
D18S51 12,19
D21S11 30,32.2
FGA 22,26
Penta D 10,12
Penta E 5,10
TH01 7,9
TPOX 10,11
vWA 14,17
|
| 支原体检测: | 荧光法（-） |
| 参考文献: |
1.Masuda T., Hoshiyama T., Uemura T., Hirayama-Kurogi M., Ogata S., Furukawa A., Couraud P.-O., Furihata T., Ito S., Ohtsuki S.
Large-scale quantitative comparison of plasma transmembrane proteins between two human blood-brain barrier model cell lines, hCMEC/D3 and HBMEC/cibeta.
Mol. Pharm. 16:2162-2171(2019)
2.Llombart V., Garcia-Berrocoso T., Bech-Serra J.J., Simats A., Bustamante A., Giralt D., Reverter-Branchat G., Canals F., Hernandez-Guillamon M., Montaner J.
Characterization of secretomes from a human blood brain barrier endothelial cells in-vitro model after ischemia by stable isotope labeling with aminoacids in cell culture (SILAC).
J. Proteomics 133:100-112(2016)
3.Weksler B.B., Romero I.A., Couraud P.-O.
The hCMEC/D3 cell line as a model of the human blood brain barrier.
Fluids Barriers CNS 10:16-16(2013)
4.Weksler B.B., Subileau E.-A., Perriere N., Charneau P., Holloway K., Leveque M., Tricoire-Leignel H., Nicotra A., Bourdoulous S., Turowski P., Male D.K., Roux F., Greenwood J., Romero I.A., Couraud P.-O.
Blood-brain barrier-specific properties of a human adult brain endothelial cell line.
FASEB J. 19:1872-1874(2005)
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hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞特点和简介
hCMEC/D3细胞系来源于人类颞叶微血管，该微血管来源于癫痫控制手术中切除的组织。原代分离物富含脑内皮细胞（CECs）。在第一代中，以人端粒酶（hTERT）催化亚基和SV40大T抗原为载体，通过慢病毒载体转导，使细胞连续永生化，然后用有限稀释克隆法选择性地分离CEC，并对克隆的脑内皮表型进行了广泛的鉴定。这种脑微血管内皮细胞系代表了一种易于生长的人血脑屏障模型，可用于与中枢神经系统（CNS）相关的病理和药物转运机制的细胞和分子研究。hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞接受后处理
1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度 80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 Procell 技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7.该细胞仅供科研使用。
