ExpiCHO-S

细胞名称:	ExpiCHO-S
细胞又名:	ExpiCHO-S细胞, ExpiCHOS细胞, 悬浮CHO细胞，悬浮CHO-S细胞
种属来源:	仓鼠
组织来源:	卵巢
疾病特征:	正常
细胞形态:	圆形
生长特性:	悬浮
培养基:	ExpiCHO Expression Medium 无血清细胞培养基（Gibco A29100）
生长条件:	气相：空气，95%；二氧化碳，8%; 温度：37 ℃,
传代方法:	1：2至1：6，每周2次。
冻存条件:	90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存
支原体检测:	阴性
细胞培养条件：	培养基：ExpiCHO培养基(Gibco A29100) 培养类型：悬浮培养 温度范围：37°C±5°C 震动器速度：对于口径19毫米的培养瓶，设置摇床转速为125±5转/分。对于具有口径25 mm的培养瓶，可以设置摇床震荡速度为120±5rpm。 培养箱气体：8%二氧化碳增湿体。同时，确保在摇床中的气体流通和交换。
细胞接种密度：	预计收获时间是转染后3天：接种密度是0.2 × 106 –0.3 × 106 viable cells/mL 预计收获时间是转染后4天：接种密度是0.1 × 106 –0.2 × 106 viable cells/mL
培养瓶接种体积：	125ml细胞培养瓶：建议接种30-35ml培养基 250ml细胞培养瓶：建议接种60-70ml培养基 500ml细胞培养瓶：建议接种120-140ml培养基 125ml细胞培养瓶：建议接种240-260ml培养基4
ExpiCHO-S 细胞图片：
ExpiCHO-S细胞说明：	在药物开发过程中，从293细胞替换为CHO细胞可能会花费很多宝贵时间，并且带来不确定性。 现在有了更佳方法。 Gibco ExpiCHO表达系统能够达到瞬时系统的最高蛋白得率。 这意味着从研究开始，您就可以一直使用 CHO 细胞。 相较于其他瞬时表达系统，ExpiCHO表达系统可提供出色的克级蛋白产量，并为您节省宝贵时间、恒温箱空间以及塑料器皿成本。  您可只使用一个培养瓶，来表达其他系统所用20或者更多培养瓶表达的蛋白量。 “ExpiCHO表达系统简单易用，比使用 大肠杆菌表达蛋白方便许多。 系统的可扩展性非常棒。 我可以同时表达30种不同的单克隆抗体（mAbs），然后选择我喜欢的一种扩大到克级。 ExpiCHO系统对我们来说是革命性的救星。”   Arjen van den Berg博士，高级科学家，细胞和分子医学，加州大学圣地亚哥分校 ExpiCOH-S细胞来源于从CHO-S中国仓鼠卵巢细胞（CHO）中筛选和分离的亚克隆（1）。ExpiCHO-S细胞是悬浮表达细胞，在配套的ExpiCHO表达培养基中具有不成团，不聚集，并可以生长到非常高的细胞密度。与标准CHO、293和高密度Expi293F细胞相比，细胞通过瞬时转染可以产生更高的蛋白质产量。   ExpiCHO-S细胞特点： •ExpiCHO-S细胞可以使目的蛋白表达获得高达3g/L的产量 ·允许快速、高产量的瞬时蛋白质生产，允许实验室开发蛋白质生物治疗剂在药物开发过程中从CHO表达的蛋白质开始到完成.   •能够在ExpCHO-S表达培养基中的高密度悬浮生长 •倍增时间短，17小时的快速倍增时间 •解冻后，20代内，ExpiCHO-S细胞都能获得一致的瞬时表达能力 •在转染后10天内保持细胞的高活力和高生产力   ExpiCHO-S细胞通常生长在加湿的二氧化碳细胞培养箱中的摇瓶平台上的烧瓶中。然而，培养基体积可从多孔板中的1L，直到摇瓶10 L培养基体积，都可以。根据表达的蛋白质和ExpiCHO-S细胞状态，可以在转染后5-14天进行蛋白质收获。
ExpiCHO-S细胞说明书：	ExpiCHO-S细胞说明书 ExpiCHO-S细胞培养方法

ExpiCHO-S细胞特点和简介

ExpiCHO-S细胞转染实验方案

ExpiCHO-S细胞实验流程图

ExpiCHO-S细胞蛋白表达产量

图1：ExpiCHO-S细胞与其他CHO细胞蛋白表达产量对比。人IgG在ExpiCHO-S细胞中表达产量高达3g/L以上，是CHO细胞表达产量的160倍； 促红细胞生成素（EPO）在ExpiCHO-S细胞中表达产量是0.5g/L， 该产量是CHO细胞的25倍；兔IgG在ExpiCHO-S细胞中表达产量是0.4mg/L, 是CHO细胞表达水平的95倍。

与Expi293相比，在ExpiCHO-S表达系统中，IgG或者其他蛋白的产量提高了0.6-97倍。


下图是人源抗体在Expi293与ExpiCHO-S细胞中的表达水平比较。

蛋白质	Expi293或当前系统(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
人源抗体	26.6	2,580	97
	4	147	33
	4	56	14.6
	22	266	12.4
	48	334	6.9
	36	190	5.3
	18	78	4.3
	85	314	3.7
	170	410	2.4
	138	325	2.4
	25	50	2.0
	102	204	2.0
	57	92	1.6
	336	491	1.5
	565	864	1.5
	450	600	1.3
	350	450	1.3
	309	383	1.2
	243	276	1.1
	352	371	1.1
	565	620	1.1
	309	302	1.0
	139	129	0.9
	11	9	0.8
	565	365	0.6
	检测不到	500
	沉淀	330

下图是兔源抗体和鼠源抗体在Expi293与ExpiCHO-S细胞中的表达水平比较。

蛋白质	Expi293或当前系统(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
兔源抗体	5	120	20
	17	178	11
鼠源抗体	216	1,412	6.5
	20	86	4.3
	60	240	4.0
	60	240	4.0
	76	196	2.6
	12	18	1.5
	16	17	1.1
	119	48	0.4
	135	47	0.3

下图是其他抗体在Expi293与ExpiCHO-S细胞中的表达水平比较。

蛋白质	Expi293或当前系统(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
铋碲	免疫印迹	免疫印迹	25
双特异性抗体	28	117	4.2
	26	90	3.5
	126	250	2.0
	NA	763
	NA	660
分泌	216	1412	6.5

下图是非抗体蛋白在Expi293与ExpiCHO-S细胞中的表达水平比较。

蛋白质	Expi293或当前系统(mg/L)	ExpiCHO (mg/L)	成倍增加
非抗体	15	82	5.5
	免疫印迹	免疫印迹	5.0
	164	68	0.4
	NA	206
Fab	85	366	4.3
	10	10	1.0
FC融合蛋白	5	8	1.7
His标签的人白细胞抗原	检测不到	12	12
病毒蛋白	免疫印迹	免疫印迹	3–5
细胞因子	免疫印迹	免疫印迹	5-10
FcR	免疫印迹	免疫印迹	2-3

ExpiCHO-S悬浮CHO-S细胞接受后处理

1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。

 2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

 3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。

 4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

 5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
 

ExpiCHO-S悬浮CHO-S细胞培养操作

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

 2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
   
     1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

     4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

    1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

    2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

    3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

ExpiCHO-S悬浮CHO-S细胞培养注意事项

 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。
 
 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。

 3.   用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

 4.   静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。

 5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

 6.   建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 Procell 技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。

 7.该细胞仅供科研使用。

125ml细胞培养瓶：建议接种30-35ml培养基

血清	细胞培养基	其他细胞试剂
南美血清：Gibco BI Gemini 北美血清：ATCC 澳洲血清: Gibco ES专用血清: ATCC Gibco	EMEM培养基: ATCC DMEM培养基: ATCC  Gibco RIPI1640培养基: ATCC  Gibco L-15培养基: ATCC F-12K培养基: ATCC DMEM/F12培养基: ATCC a-MEM培养基: Gibco IMDM培养基: ATCC	青链霉素双抗: ATCC 30-2300 Gibco 15140-122 Hyclone SV30010 细胞转染试剂: Invitrogen Lipo 2000 Invitrogen Lipo 3000 冻存液 Sigma细胞培养级DMSO 无血清细胞冻存液 胰酶细胞消化液 ATCC 30-2101 Gibco 25200-056 Hyclone SH30042.01