| 细胞名称: | GC-2spd(ts)细胞, ATCC CRL-2196 细胞, GC2spd(ts)细胞, 小鼠精母细胞 |
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| 细胞又名: | GC-2 |
| 细胞来源: | ATCC |
| 产品货号: | CRL-2196 |
| 种属来源: | 小鼠 |
| 组织来源: | 睾丸 |
| 患者年龄: | 6周 |
| 患者性别： | 雄性 |
| 细胞形态: | 上皮样细胞 |
| 生长特性: | 贴壁生长 |
| 培养基: | DMEM培养基，90%；FBS，10%。 |
| 生长条件: | 气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃, |
| 传代方法: | 1：5至1：7，每周2次。 |
| 冻存条件: | 95% 完全培养基+5% DMSO，液氮储存 |
| 支原体检测: | 阴性 |
| 安全等级: | 2 |
| 应用: | 该细胞系可用于精子发生的研究。 |
| 细胞说明： |
GC-2spd（ts）是由新分离的精母细胞与SV40大T抗原基因（pSV3neo，见ATCC 37150）和p53肿瘤抑制基因（ltrp53c9）的温度敏感突变株稳定共转染而建立的。
用G-418筛选细胞，培养6个月，限制性稀释克隆3次。软琼脂培养未观察到克隆增殖，说明这些细胞是永生化的，但未转化。
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| 参考文献: |
1.Hofmann M.-C., Abramian D., Millan J.L.
A haploid and a diploid cell coexist in an in vitro immortalized spermatogenic cell line.
Dev. Genet. 16:119-127(1995)
2.Hofmann M.-C., Hess R.A., Goldberg E., Millan J.L.
Immortalized germ cells undergo meiosis in vitro.
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91:5533-5537(1994)
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| 细胞图片： |
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GC-2spd(ts)细胞ATCC CRL-2196 小鼠精母细胞接受后处理
1) 收到细胞后 ，请检查是否漏液，如果漏液，请 拍照片发给我们。
2) 请先在显微 镜下确认细胞生长状态，去掉封口 膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中 的培养基，添加6ml本公司附带的 完全培养基。
4) 如果细胞密 度达80%-90%请及时进行细胞传代， 传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5) 接到细胞次 日，请检查细胞是否污染，若发现 污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
GC-2spd(ts)细胞ATCC CRL-2196 小鼠精母细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。 然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液 加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基 ，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶 中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并 脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清 液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿 中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞 ，根据细胞数量加入血 清和 DMSO ，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每 支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小 时以后转入液氮灌储 存。记录冻存 管位置以便下次拿取。
GC-2spd(ts)细胞ATCC CRL-2196 小鼠精母细胞培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有 上述现 象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比 例、所 需细胞因子等，确保细胞培 养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责 任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁 细胞会有少量 从瓶壁脱落，将细 胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证 实细胞活力正常， 请将细胞离心 后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下 照片及时和我们联系，信息 确 认后我们为您再免费寄送一次。
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正 常培养，待细 胞汇合度 80% 左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用 ，细胞 传代时可以一定比例和客户 自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于 和 Procell 技术 部沟通交流。由 于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我 们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问 题解决。
7. 该细胞仅 供科研使用。
