| 细胞名称： | 293FT细胞, 293FT慢病毒包装细胞, HEK293-FT细胞，HEK-293FT细胞，表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞 |
|---|---|
| 细胞又名: | HEK293-FT; HEK-293FT; HEK 293FT; HEK-293-FT; HEK293FT; 293-FT; FT-293; |
| 出品公司： | Thermofisher |
| 目录号： | R700-07 |
| 种属来源: | 人 |
| 组织来源: | 胚肾 |
| 疾病特征: | 正常 |
| 细胞形态: | 圆形 |
| 生长特性: | 贴壁生长 |
| 应用： | 293FT细胞主要用于慢病毒包装，是目前使用最广泛和效果最好的慢病毒包装细胞。 |
| 培养基: |
293FT细胞的1L完整培养基配方如下： DMEM培养基 900 ml 胎牛血清 100 ml 10mM MEM-NEAA（Non-Essential Amino Acids， 100X） 10 ml 200mM L-Glutamine（100x） 10 ml 100mM MEM丙酮酸钠（100X） 10 ml 青链霉素双抗 （100x） 10 ml 50 mg/ml遗传霉素G418（100x） 10 ml 配置好的完全培养基最好现配现用，没有用完的可以放置在4度冰箱中，保存时间可以达到半年！ |
| 生长条件: | 气相：空气，95%；二氧化碳，5-10%; 温度：37 ℃, |
| 传代方法: | 1：2至1：6，每周2次。 |
| 冻存条件: | 90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存 |
| 支原体检测: | 阴性 |
| 产品说明： |
1、 293FT细胞主要用于慢病毒包装系统，是目前最好的慢病毒包装细胞株。 2、 293FT细胞来源于293F细胞，稳表达SV40 large T抗原。细胞中SV40 large T抗原表达启动子是CMV启动子，蛋白表达水平较高而且持续稳定。这使得293FT细胞成为非常适合于慢病毒包装的宿主细胞。 3、 293FT细胞具有新霉素抗性，该抗性来自细胞中含有的SV40 large T稳表达质粒（pCMVSPORT6TAg.neo）。该新霉素基因位于SV40启动子的控制下，因此，在传代293FT细胞的时候，需要使用遗传霉素（也叫新霉素或者G418，工作浓度为500 ug/ml）进行抗性筛选传代。 4、 293FT慢病毒包装细胞的完全培养基中，需要包含500ug/ml的遗传霉素，用于细胞的筛选维持。 遗传霉素（G418）的储存浓度是50 mg/ml, 是工作浓度的100倍。 5、 慢病毒包装质粒转染的时候，需要保证细胞已经复苏24-48小时，同时需要保证293FT细胞的活力大于90% 。 6、 293FT细胞是贴壁细胞，传代的时候，需要进行胰酶消化。 7、DMEM培养基中本身就含有4 mM的L-Glutamine，但是因为L-Glutamine会随着时间降解，所以在完全培养基中，建议补加2 mM的谷氨酰胺。6 mM浓度的谷氨酰胺，能够更好维持293FT细胞的生长，更好的包装慢病毒。 8、293FT细胞的1L完整培养基配方如下： DMEM培养基 900 ml 胎牛血清 100 ml 10mM MEM-NEAA（Non-Essential Amino Acids， 100X） 10 ml 200mM L-Glutamine（100x） 10 ml 100mM MEM丙酮酸钠（100X） 10 ml 青链霉素双抗 （100x） 10 ml 50 mg/ml遗传霉素G418（100x） 10 ml 配置好的完全培养基最好现配现用，没有用完的可以放置在4度冰箱中，保存时间可以达到半年！ |
293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞接受后处理
1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度 80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 Procell 技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7.该细胞仅供科研使用。
