MLE-12细胞ATCC CRL-2110

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MLE-12细胞ATCC CRL-2110标准细胞株基本信息

细胞名称: MLE-12细胞,  ATCC CRL-2110细胞, MLE12细胞, 小鼠肺上皮细胞株
细胞又名: MLE 12; MLE12; Murine Lung Epithelial-12
细胞来源: ATCC
产品货号: CRL-2110
种属来源: 小鼠
性别: 雌性
年龄: 5个月
组织来源:
细胞来源: 该细胞系由Kathryn A.Wikenheiser于1992年在转基因鼠体内建立,通过人表面活性蛋白C基因启动子区调控的SV40大T抗原在小鼠体内形成肺肿瘤。
抗原表达: HLA A11, B15, B17, Cw1, Cw3; blood type B
癌基因: myc +; myb + ; ras +; fos +; p53 +; sis -; abl -; ros -; src -
基因表达: 肺表面活性物质蛋白B和C(SP-B,SP-C)
癌细胞诱导: 能够诱导癌细胞产生
诱导实验:
是的,裸鼠
 
(是的,裸鼠在6到9个月内产生了肿瘤)
细胞形态: 上皮样细胞
生长特性: 贴壁生长
培养基: HITES培养基,98%;FBS,2%。
存储人: M Romsdahl
生长条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37 ℃, 
传代方法: 1:5至1:10,每周2次。
冻存条件: 95% 完全培养基+5% DMSO,液氮储存
支原体检测: 阴性
安全等级: 2
应用: 该细胞可以作为转染宿主细胞。
参考文献:
Wikenheiser K.A., Vorbroker D.K., Rice W.R., Clark J.C., Bachurski C.J., Oie H.K., Whitsett J.A.
Production of immortalized distal respiratory epithelial cell lines from surfactant protein C/simian virus 40 large tumor antigen transgenic mice.
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:11029-11033(1993)

 

MLE-12细胞ATCC CRL-2110小鼠肺上皮细胞株接受后处理

1)  收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请 拍照片发给我们。
 
2)  请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口 膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
 
3)  弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的 完全培养基。
 
4)  如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代, 传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
 
5)  接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现 污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
 

MLE-12细胞ATCC CRL-2110小鼠肺上皮细胞株培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液 加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
 
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
 
     1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
 
     2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消 化。
     
     3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清 液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
 
     4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
 
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
 
      1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
 
      2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血 清和 DMSO ,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻存管做好标识。
 
     3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储 存。记录冻存 管位置以便下次拿取。

MLE-12细胞ATCC CRL-2110小鼠肺上皮细胞株培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及时和我们联系。
 
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子等,确保细胞培 养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,责任由客户自行承担。
 
3.   用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落,将细 胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证 实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确 认后我们为您再免费寄送一次。
 
4.   静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细 胞汇合度  80% 左右时正常传代。
 
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞 传代时可以一定比例和客户 自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。
 
6.   建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和 Procell 技术 部沟通交流。由 于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联 系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问 题解决。
 
7. 该细胞仅供科研使用。



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MLE-12细胞ATCC CRL-2110标准细胞株应用举例

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