| 细胞名称: | VK2/E6E7细胞, ATCC CRL-2616细胞, VK2细胞, 人阴道上皮细胞 |
|---|---|
| 细胞又名: | Vk2/E6E7; VK-2/E6E7; VK2 (E6/E7); VK2 |
| 细胞来源: | ATCC |
| 产品货号: | CRL-2616 |
| 种属来源: | 人 |
| 组织来源: | 阴道粘膜 |
| 疾病特征: | 子宫内膜异位症 |
| 患者年龄: | 32 |
| 患者性别： | 女 |
| 细胞描述： |
VK2/E6E7细胞系建立于1996年，来源于绝经前妇女经前后阴道修补术后的正常阴道粘膜组织。1996年，从绝经前妇女子宫内膜异位症子宫切除术的正常上皮组织中，建立了子宫颈外切迹1/E6E7（ATCC-CRL-2614）和宫颈内膜内End1/E6E7细胞系。用逆转录病毒载体LXSN-16E6E7在聚布伦存在下对第3代细胞进行永生化处理。在含G418的培养基中筛选克隆。
|
| 基因表达: | 细胞角蛋白8（CK8）、10（CK10）、13（CK13）、18（CK18）和19（CK19）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、转化生长因子β1、白细胞介素8（IL-8）、前列腺素E2、分泌性白细胞蛋白抑制剂、聚合免疫球蛋白受体。 |
| 细胞形态: | 上皮样 |
| 生长特性: | 贴壁生长 |
| 培养基: | Keratinocyte-Serum Free培养基，含0.1 ng/ml重组人表皮生长因子、0.05 mg/ml牛垂体提取物和44.1 mg/L附加氯化钙（最终浓度0.4 mM）。 |
| 存储人: | M Romsdahl |
| 生长条件: | 气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃, |
| 传代方法: | 1：3至1：5，每周2次。 |
| 冻存条件: | DMEM:F-12（1:1），85%；FBS，10%；DMSO，5%，液氮储存 |
| 支原体检测: | 阴性 |
| 安全等级: | 2 |
| 应用: | 这些细胞系可为研究宫颈阴道生理和感染以及检测用于阴道内应用的药物提供有效、可重复的体外模型基础。 |
| STR: |
Amelogenin X
CSF1PO 10,11
D5S818 9,10
D7S820 10,11
D13S317 9,12
D16S539 9
TH01 7,9.3
TPOX 11
vWA 16
|
| 细胞说明： |
宫颈上皮细胞系具有单层柱状上皮的特征，而宫颈外和阴道上皮细胞系具有复层鳞状非角化上皮的特征。
在没有刺激的情况下，三种细胞株都产生巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、转化生长因子beta1、白细胞介素8（IL-8）、前列腺素E2、分泌性白细胞蛋白酶抑制剂和聚合免疫球蛋白受体。
子宫内膜细胞系（End1/E6E7）也产生淋巴生成细胞因子IL-6、IL-7，以及持续检测的称为“活化时调节，正常T细胞表达和分泌”（RANTES）的趋化因子水平。
干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激可诱导或显著上调细胞因子、趋化因子和主要组织相容性复合物（MHC）Ⅱ类抗原的表达。
淋病奈瑟菌F62株菌毛型变种主动侵入这些上皮细胞系。表达绿色荧光蛋白的淋球菌侵袭这些细胞的特点是淋球菌与F-肌动蛋白的共域化。
|
| 参考文献: |
Fichorova R.N., Rheinwald J.G., Anderson D.J.
Generation of papillomavirus-immortalized cell lines from normal human ectocervical, endocervical, and vaginal epithelium that maintain expression of tissue-specific differentiation proteins.
Biol. Reprod. 57:847-855(1997)
|
VK2/E6E7细胞ATCC CRL-2616人阴道上皮细胞接受后处理
1) 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请 拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口 膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的 完全培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代， 传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5) 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现 污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
VK2/E6E7细胞ATCC CRL-2616人阴道上皮细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液 加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清 液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血 清和 DMSO ，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储 存。记录冻存 管位置以便下次拿取。
VK2/E6E7细胞ATCC CRL-2616人阴道上皮细胞培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子等，确保细胞培 养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落，将细 胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证 实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确 认后我们为您再免费寄送一次。
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇合度 80% 左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以一定比例和客户 自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 Procell 技术 部沟通交流。由 于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问 题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
