| 产品名称： | 平板计数琼脂；平板计数培养基；平板计数琼脂（标准法）；PCA培养基 |
|---|---|
| 英文名称： | Plate Count Agar (Standard Methods)；PCA |
| 培养基类型： | 营养培养基 |
| 级别： | for microbiology |
| 品牌： | ELITE-MEDIA |
| 产品目录号： | M233-01、M233-02 |
| 产品规格： | 250g、500g、2.5kg |
| 产品外观： | 麦秸色均一粉末。 |
| 颜色与澄清度： | 浅黄色透明凝胶。 |
| 保存条件： | 密封，2-25度保存。 |
| 注意事项： | 避免呼入和皮肤接触。 |
| 相关产品： | 牛奶平板计数琼脂（Milk Plate Count Agar） |
平板计数培养基产品描述：
平板计数琼脂（Plate Count Agar）简称PCA，是非选择性固体培养基，用于食品、化妆品和饮 用水中微生物计数。本培养基配方采用标准法配方。
平板计数琼脂培养基用途：
PCA培养基用于检测食品、奶制品、饮用水、化妆品中微生物含量。既用于标准方法，也用于自动化螺旋板计数法。
平板计数培养基原理：
胰蛋白胨提供有机氮源和游离氨基酸，酵母提取物提供生长因子，葡萄糖作为能量物质。平板计数琼脂培 养基中的营养成分能够支持牛奶及饮用水中绝大多数微生物的生长。平板计数琼脂培养基配方与配制方法（琼脂培养基的配制步骤）：
平板计数琼脂怎么配制呢？下面是平板计数琼脂培养基的配制步骤：| 成分 | g/L |
| 胰蛋白胨 | 5.0 |
| 酵母提取物 | 2.5 |
| 葡萄糖 | 1.0 |
| 琼脂 | 15.0 |
| pH 7.0± 0.2 |
配制方法：
1. 称取以上组分，或者直接称取本公司的平板计数琼脂培养基23.5g 本品，用1000ml去离子水重悬，加热搅拌使其全部溶解。
2. 平板计数琼脂培养基的灭菌温度是：121°C高温灭菌15min。
3. 待冷却至55°C时倒20ml培养基到90mm无菌培养皿中。
4. 对于酵母和霉菌含量高的样品，则用100mm培养皿，每个培养皿倒入20-25ml培养基。 待琼脂表面干燥后使用。
平板计数琼脂多久凝固呢？一般讲灭菌过的平板计数琼脂导入培养皿后，放置30分钟左右，培养皿中的平板计数琼脂就会凝固了，细菌计数平板也就制作成功了。
平板计数琼脂在哪灭菌呢？平板计数琼脂培养基灭菌条件一般是使用高温高压灭菌锅在121 °C条件下，湿热灭菌15分钟，就灭菌成功了！
平板计数琼脂培养基ph调制pH7.0± 0.2即可，Elite-Media公司出品的平板计数琼脂培养基一般配置成功后，pH值直接就是7.0左右，可以直接使用，几乎不用再进行调节了。
生物风出品的平板计数琼脂培养基，品牌是Elite-Media，产品品质良好，是平板计数琼脂陆桥等公司同类产品的良好替代品！
平板计数琼脂使用方法（平板计数法、大肠菌群平板计数法、菌落总数平板计数法）
方法一 菌落计数总数之稀释倒平板法
此方法是2010年版国家标准 GB 4789.2-2010中的菌落总数计数方法。
3、10倍梯度稀释样品液。取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。
4、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的1 ml稀释液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
5、稀释液移入平皿后，及时将凉至45-50 ℃的琼脂培养基(可放置于45℃水浴箱保温) 注入平皿约15-25 mL，并转动平皿使菌液稀释液和琼脂培养基混合均匀。同时将琼脂
此方法是2010年版国家标准 GB 4789.2-2010中的菌落总数计数方法。
1、称取平板计数琼脂23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，灭菌完成后，将获得的平板计数琼脂培养基置于45度水浴中备用。
2、样品的稀释及处理。取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。
2、样品的稀释及处理。取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。
3、10倍梯度稀释样品液。取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。
4、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的1 ml稀释液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
5、稀释液移入平皿后，及时将凉至45-50 ℃的琼脂培养基(可放置于45℃水浴箱保温) 注入平皿约15-25 mL，并转动平皿使菌液稀释液和琼脂培养基混合均匀。同时将琼脂
培养基倾入加有1 mL无菌生理盐水或者磷酸盐缓冲液的灭菌平皿内作空白对照。
5、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。
6、观察结果并进行计数。30-300个菌落为合适范围，出具菌落总数计数报告。
5、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。
6、观察结果并进行计数。30-300个菌落为合适范围，出具菌落总数计数报告。
方法二：菌落总数计数平板涂布法
1、称取平板计数琼脂23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、待冷却至55°C时倒20ml培养基到90mm无菌培养皿中，冷却后成为可以使用的平板计数平板，待表面干燥后使用。对于酵母和霉菌含量高的样品，则用100mm培养皿，每个培养皿倒入20-25ml培养基。 待琼脂表面干燥后使用。
2、待冷却至55°C时倒20ml培养基到90mm无菌培养皿中，冷却后成为可以使用的平板计数平板，待表面干燥后使用。对于酵母和霉菌含量高的样品，则用100mm培养皿，每个培养皿倒入20-25ml培养基。 待琼脂表面干燥后使用。
2、样品的稀释及处理。取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。
3、10倍梯度稀释样品液。取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。
4、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的0. 1 ml或者0.2 ml稀释液于倒好的计数平板中，每个稀释度做两个琼脂平板。
5、使用无菌的玻棒或者其他无菌涂布物品，将稀释液在平板上涂布均匀。
6、将平板置于36±1℃温箱内培养48±2h。
7、观察结果并进行计数。30-300个菌落为合适范围。出具菌落总数计数报告。
平板计数法、菌落总数计数法的计数方法、规则和报告书写（大肠菌群平板计数报告、平板菌落计数规则）
平板计数法怎么计数？这个是很多利用平板计数琼脂做菌落总数计数的技术人员非常关心的问题，具体的平板菌落计数方法如下：
3、10倍梯度稀释样品液。取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。
4、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的0. 1 ml或者0.2 ml稀释液于倒好的计数平板中，每个稀释度做两个琼脂平板。
5、使用无菌的玻棒或者其他无菌涂布物品，将稀释液在平板上涂布均匀。
6、将平板置于36±1℃温箱内培养48±2h。
7、观察结果并进行计数。30-300个菌落为合适范围。出具菌落总数计数报告。
平板计数法、菌落总数计数法的计数方法、规则和报告书写（大肠菌群平板计数报告、平板菌落计数规则）
平板计数法怎么计数？这个是很多利用平板计数琼脂做菌落总数计数的技术人员非常关心的问题，具体的平板菌落计数方法如下：
1、选取菌落数在30-300CFU之间的无蔓延菌落生长的平板进行计数。
2、有较大片状生长菌落的平板不宜采用。
3、如果片状菌落不足平板一半，而另一半平板菌落分布均匀，可计算分布均匀的一半，再乘以2。
4、如果平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则每条单链作为一个菌落计算。
平板菌落计数法公式使用案例1：
平板菌落计数法的公式使用案例2：
5、菌落数小于100CFU时候，按照“四舍五入”原则修约，以整数报告。
6、菌落数大于等于100CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面用0替代位数；也可以使用10的指数的形式来表示，按照“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7、若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
8、若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
9、称重样品以CFU/g为单位填写报告，体积取样以CFU/ml为单位填写报告。
平板菌落计数法公式和平板菌落计数的CFU计算方法
9、称重样品以CFU/g为单位填写报告，体积取样以CFU/ml为单位填写报告。
平板菌落计数法公式和平板菌落计数的CFU计算方法
1、如果只有一个稀释度平板的菌落数在适宜范围，则计算该稀释度两个平板菌落的平均数，在乘以稀释倍数，作为每克或者每毫升样品中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平板菌落数均在适宜范围，则按照以下公式计算：
平板菌落计数法公式使用案例1：
平板菌落计数法的公式使用案例2：
3、如果所有的平板菌落数均大于300，计算最高稀释度平板的平均菌落数。
4、所有平板菌落数均小于30，计算最低稀释度平板的平均菌落数。
5、样品原液和所有稀释度平板均无菌生长，以小于1乘以最低稀释倍数计算。
6、所有稀释度平板菌落数均不在30-300之间，有些小于30，有些大于300，则以最接近30-300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
平板菌落计数报告案例
编号 菌落总数 报告方式 单位
1 95.5 96
2 1680 1700或者1.7*102
3 均为蔓延菌落 报告“菌落蔓延” 所有单位均为CFU/g或者CFU/ml，CFU大写
无法计数
4 空白对照有菌 本次检测
结果无效
平板计数琼脂使用方法（平板计数法）英文操作说明
Spread Plate Method:
1. Prepare decimal dilutions in sterile diluent to obtain 30-300 CFU per plate.
2. Aseptically inoculate agar surface with 0.1ml of well mixed diluted sample.
3. Using a sterile spreader device, spread the dilution evenly over the surface of the agar.
4. Incubate plates aerobically for 48 +/- 2 hours at 35ºC.
Pour Plate Method:
1. Melt agar by placing in a boiling waterbath until liquified.
2. Cool media to 45-50ºC. Maintain in a 45-50º waterbath until ready to pour.
3. Prepare decimal dilutions in sterile diluent to obtain 30-300 CFU per plate.
4. Place a 1ml inoculation into a sterile petri plate.
5. Aseptically pour approximately 18ml of the cooled media (45-50ºC.) over the inoculum. Carefully swirl the plate to mix the inoculum evenly.
Note: After autoclaving, do not heat media longer than three hours at 45-50ºC. Sterile solidified medium can only be remelted once.
6. Allow media to solidify.
7. Incubate plates aerobically for 48 +/- 2 hours at 35ºC.
Spread Plate Method:
1. Prepare decimal dilutions in sterile diluent to obtain 30-300 CFU per plate.
2. Aseptically inoculate agar surface with 0.1ml of well mixed diluted sample.
3. Using a sterile spreader device, spread the dilution evenly over the surface of the agar.
4. Incubate plates aerobically for 48 +/- 2 hours at 35ºC.
Pour Plate Method:
1. Melt agar by placing in a boiling waterbath until liquified.
2. Cool media to 45-50ºC. Maintain in a 45-50º waterbath until ready to pour.
3. Prepare decimal dilutions in sterile diluent to obtain 30-300 CFU per plate.
4. Place a 1ml inoculation into a sterile petri plate.
5. Aseptically pour approximately 18ml of the cooled media (45-50ºC.) over the inoculum. Carefully swirl the plate to mix the inoculum evenly.
Note: After autoclaving, do not heat media longer than three hours at 45-50ºC. Sterile solidified medium can only be remelted once.
6. Allow media to solidify.
7. Incubate plates aerobically for 48 +/- 2 hours at 35ºC.
