| 培养基名称: | TSI培养基（3%氯化钠），3%氯化钠三糖铁琼脂 |
|---|---|
| 英文名称: |
Triple Sugar Iron Agar（3%Nacl） |
| 培养基类型: | 鉴别培养基 |
| 产品目录号: |
M720-02 |
| 产品规格: | 250g 查看其它规格 |
| 保存条件: |
避光，密封，阴凉干燥处保存。 |
| 产品性状: |
浅粉色粉末。 红色透明至略半透明凝胶。 |
| 注意事项: |
避免摄入、呼入、皮肤接触。配制时在通风橱中进行，戴口罩、手套、护目镜。 |
| 相关产品: |
三糖铁琼脂（2号） Triple Sugar Iron Agar |
产品描述：
3%氯化钠三糖铁琼脂培养基是嗜盐弧菌鉴别性固体培养基。本培养基配方采用《细菌学鉴定手册》给出的配方。3%氯化钠三糖铁琼脂是在TSI培养基的基础上增加了盐的浓度，更有利于嗜盐弧菌的生长。
TSI培养基（3%氯化钠）的工作原理：
细菌的鉴别归根结底是根据该种细菌能够水解、利用那些化合物。TSI培养基的鉴别依据是肠杆菌发酵3种糖类（即葡萄糖、乳糖、蔗糖）的能力和H2S生成能力，或者 说是四种代谢反应：葡萄糖发酵、乳糖和（或）蔗糖发酵、硫化物（这里指硫化铁）生成、氨基酸氧化脱氨作用。
三糖铁琼脂培养基采用的是斜面培养法，即三糖铁琼脂斜面，提供两种氧气环境：有氧的培养基表面（斜面，slant）和缺少氧气的培养基深处（试管底部，butt）。葡萄糖发酵产酸量很少，只能影响局部的pH值。培养基中的葡萄糖含量很少，葡萄糖被耗尽后，不能发酵乳糖糖和蔗糖的肠杆菌继而以 蛋白胨为碳源。氨基酸氧化脱氨产生NH3，使培养基斜面处呈碱性。能够发酵乳糖和（或）蔗糖的肠杆菌在无氧条件下能够产大量的酸 ，使整个培养基呈酸性。有的菌种发酵糖类时还产气（主要为二氧化碳），表现为琼脂培养基出现断裂或有气泡。硫化氢在碱性条件下 与铁离子生成黑色沉淀——Fe2S3 ，使培养基变黑。但酸性条件下，Fe2S3不稳定，硫化氢则以气体形式被释放。因此对于快速产酸的 微生物，H2S生成可能被掩蔽。
酚红是酸碱指示剂，变色范围：pH6.6(黄色)~pH8.4(红色) 。中性条件下显红色，当pH>8.4，变成紫红色。
蔗糖有助于大肠菌的快速检测，鉴于其发酵蔗糖的速度高于发酵乳糖的速度。另外，某些革兰氏阴性菌不能够发酵乳糖，只能发酵蔗糖。
硫代硫酸根离子为H2S生成反应提供底物。
铁盐（硫酸亚铁或柠檬酸铁铵）是H2S指示剂，与H2S反应生产黑色沉淀。培养基变黑证明有H2S生成。值得注意的是，对于TSI培养基来说，这一结论的反向推论是不成立的，即培养基没有变黑并不能证明没有H2S生成。原因见上文。
牛肉提取物和酵母提取物为细菌生长提供微量元素和生长因子。高浓度氯化钠对一般肠道菌有抑制作用，但适于嗜盐弧菌的生长。
蛋白胨作为主要氮源，也是非发酵型微生物的碳源。对于不能利用乳糖和蔗糖的微生物，当直接碳源葡萄糖耗尽后蛋白胨也作为碳源。
3%氯化钠三糖铁琼脂培养基配方与配制方法
| 培养基成分： | 含量：g/L |
|---|---|
| 混合蛋白胨 | 20.0 |
| 牛肉提取物 | 3.0 |
| 酵母提取物 | 3.0 |
| 葡萄糖 | 1.0 |
| 乳糖 | 10.0 |
| 蔗糖 | 10.0 |
| 氯化钠 | 30.0 |
| 柠檬酸铁铵 | 0.3 |
| 硫代硫酸钠 | 0.3 |
| 酚红 | 0.024 |
| 琼脂 | 12.0 |
| pH |
7.4± 0.2 |
配制方法：
1. 称取脱水培养基89.5g，用1L去离子水重悬，浸泡10min。
2. 摇晃混匀，不断搅拌，煮沸1min使其完全溶解。分装到16X150mm试管中，液面高度为三分之一试管高度。使用棉塞或可透气的试管盖。
3. 121°C高温蒸汽灭菌15min。不要过度加热。
4. 在冷却过程中倾斜放置试管，制备4-5cm长斜面，管底高度2-3cm。
实验方法
接种方法与注意事项：
1. 将三糖铁琼脂制备成较短的斜面，使试管底部至斜面的距离增大，试管口用松散透气的棉塞塞住，不能堵死管口。以上处理的目的是获得缺氧与有氧两种培养环境。
2. 从选择性培养基上的单菌落中心处挑菌（越靠菌落中心的细胞越年轻），先用接种针穿刺接种到试管底部（必须接种到最底部，否则结果无效），抽出接种针，在斜面上划线接种。
3. 将接种后的试管置于培养箱中，35-37ºC，有氧，培养18-24h。观察结果。
