| 产品名称: | PEI转染试剂、Polyethylenimine、线性聚乙烯亚胺、线性PEI、转染级别PEI |
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| 英文名称: |
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™) (Polysciences#23966-1 1g; Polysciences#23966-100 100mg) PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) (Polysciences#24765-1 1g; Polysciences#24765-100 100mg) |
| 规格: | 1 g, 1 ml |
| 产品目录号: |
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™) 1g Polyscience#23966-1 PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) 1g Polyscience#24765-1 MaxFect Transfection Regent 1ml Biofeng# A609 |
| 贮存条件: | 避光，-20度 |
| CAS号: |
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™) CAS Number: 9002-98-6, 26913-06-4 PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) CAS Number: 49553-93-7 MaxFect Transfection Regent CAS Number: 49553-93-7 |
| 物理性状: | 固体为白色或近白色粉末。 1 mg/mL水溶液透明，接近无色或略显黄色。 |
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用途: |
细胞培养级别的质粒转染。本产品仅供科研使用，不能用于临床治疗。 |
| PEI MW25000和PEI Max MW40000区别： |
PEI MAX MW40000 ( Polysciences#24765-1)是线性化聚乙烯亚胺PEI MW25000(Polysciences#23966-1)的升级产品，是一种功能更为强大的高效瞬时转染试剂。PEI MAX MW40000与PEI 25000的区别在于： 1）完全水解（去乙酰化） 2）PEI 25000的盐酸盐形式，具更高的水溶特性 3）含更长连续性乙烯亚胺片段，其转染效率比PEI MW25000提高11%以上。
4）PEI MAX 40K比PEI 25K更易于使用，并且更高效。PEI 25K转染溶液通常需要几个小时才能制备，而PEI MAX 40K可以在两个小时内转化为即用型可溶性溶液。
5）PEI 25K含有4-11%的残余丙酰基，可防止聚合物主链与DNA强烈结合。PEI MAX 40K完全去乙酰化的结构意味着每批产品的表现始终如一，稳定性更强。 |
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储存浓度: |
1 mg/ml |
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工作浓度: |
3 ug/ml 左右，每ml培养基加入3 ul储存液。 |
| PEI转染试剂配置方法： |
1. 称取100mg PEI转染试剂，溶解于100ml无菌水中。配置的终浓度是1 mg/ml. 2. 缓慢使用稀盐酸，调节PH至7.0，一定不要让pH过了，一旦过了效果就不好了。 3. 使用0.1um或者0.22um无菌过滤器，过滤除菌。 4. 分装成每管500ul-1ml，-20度，保存，备用。 5. 使用超纯水配置，器具一定要灭菌干净，防止支原体污染。 |
| 适用范围: |
本产品适用于绝大多数真核细胞质粒转染：HEK 293，293T，A549，B16F10，HeLa，Hepa 1-6，Hepa-1c1c7，HepG2，BHK-21，C2C12，C6，CHO-K1，COS-1，COS-7，Daoy，DU 145，K562，KB，LL/2(LLC1)， LNCaP-FGC，MCF-7，MEL，Neuro-2a，NIH3T3，OVCAR-3，PC-3，PC-12等。 |
| 细胞培养基: |
PEI转染试剂适用于大多数常用细胞培养基，且转染前后不需要更换培养基，血清的存在不影响转染效率。 |
| 转染时细胞密度： |
一般来说，当细胞密度达到60% - 80%时进行转染可以取得较高的转染效率。然而，不同细胞的最适转染密度都不尽相同。因此在初次转染某种细胞时，可以通过预实验先确认该细胞最佳的转染密度。 |
| 转染质粒纯度和浓度： |
用于细胞转染的DNA应具有较高的纯度，且无内毒素残留(推荐使用无内毒素质粒大提试剂盒进行质粒抽提)。质粒浓度尽量高一些，建议大于500 ng/ul. |
| 转染比例： |
DNA：PEI = 1:3 1ml细胞培养液，建议使用1 ug-3 ug DNA 和3 ul - 9 ul PEI转染试剂储存液。具体根据细胞情况自由调整。
在初次转染某种细胞时，推荐PEI和DNA的比例为2:1，即1 μg DNA使用2 μl PEI。转染1 μg DNA所使用的PEI转染试剂剂量可以在1 - 5 μl之间进行调整以获得最佳的转染效率。
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| 转染后细胞培养时间: |
对于绝大多数细胞实验而言培养24 - 48 h即可，如实验情况特殊可在12 - 72 h之间进行优化。
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| 细胞转染步骤： |
以6孔板细胞培养转染为例: 使用细胞培养液3ml，DNA质粒3ug，PEI转染试剂9ug。可以根据不同细胞特性，增加DNA和PEI使用量。 细胞培养
1. 转染前24 h左右对细胞进行传代，接种密度约为1 - 3 × 105 cells/well。细胞接种密度，大约在60%左右。
2. 过夜培养。
3. 吸出培养液，使用新鲜培养液清洗3-4次。然后，加入2.7 ml新鲜配置的完全培养基。因为细胞过夜生长的分泌物有可能影响转染效率，所有建议进行细胞清洗操作。更换新鲜培养液，有助于转染后的细胞表达和生长，防止细胞营养的不足。 也可以不吸出培养液，不更换新鲜培养液，直接进行细胞转染。 4. 当细胞汇合度达到60% - 80%时，转染可以取得较高的转染效率。 PEI/DNA复合物配置 1. 在1.5 ml无菌离心管中加入150 μl opti-MEM无血清培养基，并加入3 ug DNA质粒，用移液器轻轻混匀。
2. 在1.5 ml无菌离心管中加入150 μl opti-MEM无血清培养基，并加入9 ug PEI转染试剂储存液，用移液器轻轻混匀。
3. 将PEI-opti-MEM滴加至DNA-opti-MEM中，用移液器轻轻混匀，室温静置15 - 30 min后可用于转染。注意：形成的PEI/DNA复合物溶液尽量在30 min内使用。
4. PEI/DNA复合物的形成，一定是分别在无血清培养基中稀释后，再进行混匀。血清的存在会干扰复合物的形成。 细胞转染 1. 将PEI/DNA复合物混合液滴加至6孔板培养基中，轻轻晃动吹打培养液使PEI/DNA复合物均匀分散。 2. 过夜培养24-72小时。 |
| 初始转染条件： |
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| PEI转染效率： |
细胞种类 中文名称 PEI 转染效率 HEK293 人胚肾细胞 90%-95% 293-T 人胚肾细胞 90%-95% CHO-K1 仓鼠卵巢细胞 80%-90% U251 人源神经胶质瘤细胞 80%-90% Hela 人源宫颈癌细胞 70%-80% COS7 猴 SV40 转化肾细胞 70%-80% HepG2 人源肝癌细胞 70%-80% NIH/3T3 小鼠胚胎成纤维细胞 60%-70% 胶质瘤干细胞 人源胶质瘤干细胞 60%-70% Patu8988 人源胰腺癌细胞 60%-70% U2OS 人源骨肉瘤细胞 60%-70% |
| 产品图片： |
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™) (Polyscience#23966-1 1g) PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) (Polyscience#24765-1 1g)   |
| 相关产品： |
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参考文献和操作文档： |
PEI MW25000转染试剂使用方法 PEI MAX转染贴壁和悬浮细胞方法 PEI MW25000(Polyscience#23966)转染试剂配置方法 PEI MW25000转染试剂配置方法2 PEI MAX MW4000转染试剂配置和使用方法 PEI质粒转染细胞方案 PEI质粒转染293T细胞实验方案 PEI转染悬浮细胞293F操作方法 PEI MAX转染质粒Expi293悬浮细胞实验方案 PEI 转染质粒AAV腺病毒扩增案例 PEI转染质粒慢病毒扩增案例 PEI转染质粒扩增第三代慢病毒方案 PEI转染质粒扩增逆病毒方案 PEI转染质粒扩增狂犬病EIAV病毒实验方案 |
PEI转染试剂质粒转染效果图
PEI转染细胞常见问题与解决方案
. 转染效率偏低
1. PEI与DNA的比例不合适
通过预实验优化ExFect与DNA的最佳比例：在ExFect 1 - 5 μl/μg DNA范围内尝试，优化DNA的使用量：以24孔板为例，在0.5 - 2 μg/孔范围内优化(具体可参见表一)。在后续的实验中选择转染效率高、细胞毒性低的比例进行转染。
通过预实验优化ExFect与DNA的最佳比例：在ExFect 1 - 5 μl/μg DNA范围内尝试，优化DNA的使用量：以24孔板为例，在0.5 - 2 μg/孔范围内优化(具体可参见表一)。在后续的实验中选择转染效率高、细胞毒性低的比例进行转染。
2.PEI原液或/和DNA原液未经无血清培养基稀释直接混合
PEI和DNA需分别在无血清培养基条件下按一定比例稀释后再进行混合孵育。
3. 转染时细胞密度不合适
多数情况下，当细胞汇合度达到60% - 80%时，转染可以取得较高的转染效率。然而细胞类型不同，最适的转染密度也不尽相同。可以通过预实验优化细胞转染密度。
4.DNA质量偏低(降解或内毒素)
为实现高效率、低毒性的转染，应使用高纯度、无菌、无内毒素的质粒DNA。
5.PEI/DNA复合物形成的反应体系中包含血清
当ExFect/DNA复合物形成反应体系中存在血清时，ExFect/DNA复合物无法正常形成。
6.转染体系中存在转染抑制因素
当转染体系中存在多聚阴离子聚合物时(例如：硫酸葡聚糖、肝素等)，转染将无法正常进行。因此应避免上述物质存在于细胞转染体系中。
7.细胞状态偏差
传代次数太少或者太多都将导致细胞转染效率的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性，应尽量使用适度传代的细胞系，并尽量在平行实验时保持细胞传代次数的一致性。另外，支原体的感染或爆发会影响细胞的转染效率。建议使用支原体检测和/或清除试剂盒处理。
. 转染后细胞状态差
1.转染后细胞培养时间过长
多数情况下，在完全培养基中进行转染，24 h内无需换液处理，但是培养时间过长可能会导致细胞状态较差，建议根据实验需要合理安排后续实验时间。
2.转染时细胞密度不合适
多数情况下，当细胞汇合度达到60% - 80%时转染可以取得较高的转染效率。细胞密度过低导致细胞生长缓慢，对外来刺激变得较为敏感，使得转染毒性增高。细胞密度过高，会导致细胞发生接触抑制，加快细胞凋亡。
3.PEI/DNA过量
转染试剂过量会导致较高的细胞毒性。尝试降低转染试剂的使用比例或者减少DNA用量，具体比例参见表一。
4.PEI/DNA复合物加入培养基时分布不均匀
局部ExFect/DNA复合物浓度过高是导致细胞毒性偏高的最常见的原因之一。当PEI/DNA添加到细胞培养孔/皿之后，应即刻轻轻摇动培养板/皿，使之完全混匀。
5.细胞状态偏差
传代次数太少细胞状态未恢复，或者传代次数太多细胞老化，都将由于细胞生长状态不适而导致转染试剂毒性增加。因此应尽量使用适度传代的细胞，降低细胞代次差异对实验结果造成的影响。
