| 出品公司: | 生物风 |
|---|---|
| 感受态细胞名称: | TG1 Ultracompetent cells；TG1 |
| 菌种类型: | E.coli |
| 产品规格: | 10X100 微升 |
| 转化效率: | 大于1X10的9次方 |
| 基因型: | [F´traD36 proAB lacIqZΔM15] supE thi-1Δ(lac-proAB)Δ(mcrB-hsdSM)5(rK–mK–) |
| 抗性: | 无抗性 |
| 质粒转化条件: | 42 ℃热激 |
| 生长条件: | 37 ℃, 有氧 |
| 用途: | 非毒性蛋白表达。 |
| 储存条件: | -80 ℃或者更低温度保存，避免反复冻融。 |
感受态细胞特点和简介
TG1来源于E. coli K-12菌株，是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株，在平板上37℃，7 h可见克隆。主要的噬菌体展示用菌株，同时也可用于普通质粒的构建，lacIqZΔM15的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶。TG1感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>109cfu/μg DNA。
感受态细胞制备方法
生物风在氯化钙感受态细胞制作方法的基础上进行了改良，采用最新的二价锰法感受态细胞制备方法，制备得到TG1超级感受态细胞（Ultracompetent cell）。转化效率是常规氯化钙制备法的10倍。
感受态细胞操作方法
1. 取TG1感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。
注意：一次转化TG1感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl TG1感受态细胞为例。
2. 向TG1感受态细胞悬液中加入目的 DNA (100μl 的感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和），轻弹混匀，在冰浴中静置30 分钟。
3. 将离心管置于 42 ℃ 水浴中放置60-90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使TG1感受态细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
注意：此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8分钟左右；如果室温较低，可延长时间至8-15分钟左右。条件允许建议使用 42 ℃ 热激方法。
4. 向每个离心管中加入900 μl无菌的SOC 或LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于37 ℃摇床振荡培养45 分钟（150 rpm），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5. 将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的TG1感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或者LB 固体琼脂培养基平板上，用无菌的弯头玻棒涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被完全吸收后，倒置平板，37 ℃培养12-16 小时。
注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化质粒总量较多，可取更少转化产物涂布平板；反之，如转化的质粒总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板；对于连接产物的转化菌液，可以通过离心（4000 rpm，2分钟）后倒掉大部分培养液上清，吹打悬浮菌体后，将其涂布于一个平板中。
6. 涂布剩余的菌液可置于 4℃冰箱中保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的培养平板。
感受态细胞注意事项
1. TG1感受态细胞应保存在-70 ℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。
4. 用于转化的连接产物或质粒的体积不能超过感受态细胞体积的15%.
5. 质粒超过7.5 kb后，随尺寸的增加转化效率会下降，质粒的尺寸超过10 kb时，在大肠杆菌增殖过程中也可能会出现质粒缺失现象；
6. 用于转化的质粒量在0.1 pg~50 ng间的效果最好，超过50 ng质粒时，平板上单克隆数目会增加，但是转化效率会下降。
7. 42 ℃热击时间与离心管的厚度、菌液的体积、转入片段的大小直接相关，一般建议热击60-90秒，热击时间不宜超过90秒，否则转化效率会下降很快；
