| 出品公司: | Invitrogen |
|---|---|
| 感受态细胞名称: | KM71H酵母, KM71H毕赤酵母 |
| 菌株类型: | 毕赤酵母 |
| 产品目录号: | C182-00 |
| 培养基: | YPD培养基 |
| 生长条件: | 28-30 ℃, 有氧 |
| 基因型: | aox1::ARG4, arg4 |
| 表型: | MutS, Arg+ |
| 抗性: | 氨苄和卡那 |
| 质粒转化条件: | 电转 |
| 应用: | 蛋白表达 |
| 诱导方法: | 甲醇 |
| 菌株特点: |
KM71H是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。 毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。 KM71H毕赤酵母可以在YPD培养基中生长。 KM71H毕赤酵母被推荐用来表达含有Zeocin抗性的载体载体重组质粒，例如pPICZ A,B,C系列的载体。 在筛选KM71H重组转化菌株时，Zeocin抗生素的工作浓度是100 ug/ml。 KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一个片段缺失，当pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C转化到KM71H中时只能产生出MutS转化株，不必在进行Mut基因型的筛选了。 KM71H的来源母细胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一个突变,这使得菌株无法在不含有精氨酸的培养基中生长。而KM71H酵母细胞中在AOX1基因处插入了一个正常的arg4基因，从而形成了KM71H的MutS, Arg+ 表型。 将约2kb 的Arg4基因克隆出来后插入到KM71H来源菌株内的野生型的AOX1基因的BamH I（16 bp）和Sal I（227 bp）中间，从而构建成功KM71H。ARG4基因直接替换了AOX1基因 的16-227片段序列。 KM71H毕赤酵母细胞的优点是不需要利用甲醇minimal media筛选菌株的Mut基因型，因为所有的转化株都是MutS菌株。另外，AOX1基因并没有被完全删除，理论上你可以用自己的基因替换其中的Arg4基因，从而生成MutS, Arg-的转化株，但是由于实验表明该基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生长，所以并不鼓励大家进行这种基因替换尝试。 |
KM71H
价格：800元
联系方式：I47-825O-882O
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