| 产品名称： | 缓冲性李斯特菌增菌肉汤；BLEB培养基 |
|---|---|
| 英文名称: | Buffered Listeria Enrichment Broth；BLEB |
| 培养基类型: | 选择性培养基 |
| 级别: | for microbiology |
| 品牌: | ELITE-MEDIA |
| 产品目录号: | M1135-01、M1135-02 |
| 产品规格: | 250g、500g 选择性添加剂需另购 |
| 产品外观: | 麦秸色均一粉末。 |
| 颜色与澄清度: | 琥珀色透明溶液，或许有轻微沉淀。 |
| 保存条件: | 密封，2-25度保存。 |
| 注意事项: | 避免呼入和皮肤接触。 |
| 相关产品: | BLEB选择性添加剂（BLEB Selective Supplement） |
产品描述：
缓冲性李斯特菌增菌肉汤（Buffered Listeria Enrichment Broth）简称BLEB培养基，入BLEB选择性添加剂后用于选择性增菌食品中的单核增李斯特菌。本培养基采用FDA和《细菌学分析手册》推荐的配方。原理：
该培养基中含有大豆蛋白胨和胰酪蛋白胨，提供氨基酸和其它含氮化合物。氯化钠维持渗透压平衡。葡萄糖是能量来源。磷酸盐是缓冲体系。酵母提取物提供B组维生素和其它生长因子。丙酸盐的加入是为了拯救受损和受伤的微生物。环己酰亚胺抑制腐生真菌，而萘啶酸和吖啶黄分别抑制革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌生长。配方与配制方法：
| 成分 | g/L |
| 胰蛋白胨大豆肉汤 | 30 |
| 酵母提取物 | 6 |
| 磷酸二氢钾（无水） | 1.35 |
| 磷酸氢二钠（无水） | 9.6 |
| 丙酸钠 | 1.11 |
| Final pH 7.3 ± 0.1(25°C) |
配制方法：
用1L去离子水重悬48.06g BLEB培养基，加热使培养基完全溶解。
分装225ml培养基到每只瓶中。
121°C高温蒸汽灭菌15min。
在30°C培养4h后，向225ml培养基中加入2.5ml BLEB选择性添加剂（BLEB Selective Supplement）。
BLEB选择性添加剂（BLEB Selective Supplement）
| 成分 | mg/L |
| 盐酸吖啶黄 | 10 |
| 萘啶酸 | 40 |
| 环己酰亚胺 | 50 |
实验方法：
1. 取样可能被污染的样本。2. 如果FDA实验指导要求，可复合子样本。
3. 预增菌：取25g样本加入到225ml缓冲性李斯特菌增菌肉汤基础中，如果需要，可均质。30°C培养4h。
4. 在第4h时，加入3.4ml BLEB选择性添加剂到培养物中。
5. 继续在30°C选择性增菌共计48h。
6. 分别在第24h和第48h，将BLEB培养物划线接种到以下一种含有七叶苷的选择性分离琼脂中：改良牛津培养基（Modified Oxford Medium）、PALCAM琼脂、LPM琼脂。
结果解读：
李斯特菌菌落是黑色的，并且带有黑色晕圈。
对纯化分离物进行进一步鉴定时，可以参考以下几种可选的试验的结果。
1. 用动力试验培养基（Motility Test Medium）或SIM培养基进行动力试验。运动形态应该是特征性的伞状生长形态。从30°C或更低温度的培养物中挑取单菌落接种。李斯特菌菌种是细长的、短杆菌，进行轻微旋转或翻滚运动。要与已知培养物进行比对。球形、大杆状或者能够进行快速、游泳运动的杆菌都不是李斯特菌。
2. 过氧化氢酶试验：用过氧化氢酶试剂检测过氧化氢酶活性，李斯特菌为过氧化氢酶阳性菌。
3. 对16-24h培养物进行革兰氏染色。所有李斯特菌都是短、革兰氏阳性菌杆菌。如果使用超过24h的培养物，革兰氏染色结果可能多变。
4. 进行木糖-鼠李糖反应试验。将以下碳水化合物以0.5% 浓度加入到紫色碳水化合物肉汤（含德拉姆管）中：葡萄糖、麦芽糖、鼠李糖、甘露醇和木糖。35ºC 培养7天。李斯特菌产酸不产气，反应结果为阳性。李斯特菌所有菌种都应该是葡萄糖和麦芽糖阳性。除格雷氏李斯特菌（Listeria grayi）外，所有李斯特菌菌种都应该是甘露醇阴性。单核增李斯特菌（L. monocytogenes）不能利用木糖但能利用鼠李糖。
5. 进行CAMP试验(Christie-Atkins-Munch-Peterson)。其它所需的微生物为beta-溶血型金黄色葡萄球菌和（或）马红球菌。培养后检查平板上的溶血反应。单核增李斯特菌和斯氏李斯特菌（L. seeligeri）在金黄色葡萄球菌划线附近表现出溶血加强。绵羊李斯特菌（L. ivanovii）在接近马红球菌划线处溶血反应加强。其它李斯特菌菌种是非溶血型。建议用已知李斯特菌分离物在独立的羊血琼脂平板上进行参照试验，以确定试验操作无误。
6. 参考已被批准的快速鉴定方法。
7. 单核增李斯特菌分离物也可能需要按照FDA方法进行亚型鉴定（通过血清学法或遗传学法）。
其它细菌菌种也可能在含有七叶苷的培养基上表现为黑色至棕色菌落，但是需要超过48h才能形成。
