| 产品名称： | MMAs培养基；含有硫酸铵的基础甲醇培养基 |
|---|---|
| 英文名称： | Minimal Methanol with Ammonium sulfate Medium；MMAs medium |
| 培养基类型： | 基础培养基 |
| 级别： | AR级 |
| 品牌： | ELITE-MEDIA（艾礼培养基） |
| 产品目录号： | M377-01、M377-02 |
| 产品规格： | 1L(无菌液体,500mL/瓶)、5L(无菌液体，1L/瓶)、20g（同MGAs培养基）、100g（同MGAs培养基） |
| 产品外观： | 浅黄色至乳白色均一粉末。 |
| 颜色与澄清度： | 接近无色的透明溶液。 |
| 保存条件： | 密封，2-8°C避光保存。 |
| 注意事项： | 避免摄入、吸入、皮肤接触。 |
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MGMa培养基 MMMa培养基 MGAs培养基 |
产品描述：
MMAs培养基(Minimal Methanol with Ammonium sulfate Medium)即含有硫酸铵的基础甲醇培养基，与MGAs培养基一起使用，用于甲醇诱导的毕赤酵母重组蛋白表达。MGAs培养基主要用于表达前的扩增培养，而MMAs是诱导表达时所用的培养基。
这些培养基适用于以Zeocin为筛选标记、甲胺或（和）甲醇诱导的毕赤酵母表达系统：pFLD载体、pFLDα载体、X-33酵母、KM71H酵母、SMD1168H酵母。 。
配方与配制方法：
| YNB（不含硫酸铵） | 1.7 g |
| 硫酸铵 | 5.0 g |
| 生物素 | 0.4 mg |
| 甲醇 | 5 ml |
配制方法：
用100mL蒸馏水溶解6.7g MGAs培养基基础，用0.2µm滤膜过滤除菌。
将900ml蒸馏水121℃高压蒸汽灭菌20min。
冷却后混合上述两种溶液。
再加入5ml 过滤除菌的甲醇。
甲胺诱导的毕赤酵母蛋白表达实验方法：
诱导表达可以使用甲醇、甲胺或者甲醇加甲胺诱导FLD1 基因的表达。以下以野生型X-33菌株为例的诱导流程如下。
1. 对于任一形式的诱导方法，均用MGAs培养基，30℃，250–300 rpm，摇床培养至OD600 达到4。
2.室温，1500–3000×g ，离心5min，收集细胞。
然后：
• 对于以甲醇为诱导剂的，弃掉上清液，用1/5原始体积的MMAs培养基重悬菌体沉淀。
• 对于以甲胺为诱导剂的，弃掉上清液，用1/5原始体积的MGMa培养基重悬菌体沉淀。
• 对于以甲胺和甲醇为诱导剂的，弃掉上清液，用1/5原始体积的MMMa培养基重悬菌体沉淀。
3. 30℃培养5天。对于含有甲醇或者甲醇和甲胺的培养基，每隔24h加入终浓度0.5%的100%甲醇以保持诱导。
时间点:
0, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 120 h
在下面给出的时间点，转移1mL菌液到1.5mLEP管中，用桌面离心机的最高转速，室温条件下，离心2-3min。这些样品将用于分析表达水平，以确定诱导后的最佳收获时间。
