| 培养基名称: | TSI培养基，三糖铁琼脂，三糖铁培养基 NO.1 |
|---|---|
| 英文名称: |
Triple Sugar Iron Agar Triple Sugar Iron Agar（Medium 2） |
| 培养基类型: | 鉴别培养基 |
| 产品目录号: |
M720-01 |
| 产品规格: | 500g ►查看其它规格 |
| 保存条件: |
避光，密封，阴凉干燥处保存。 |
| 产品性状: |
浅粉色粉末。 红色透明至略半透明凝胶。 |
| 注意事项: |
避免摄入、呼入、皮肤接触。配制时在通风橱中进行，戴口罩、手套、护目镜。 |
| 相关产品: |
三糖铁琼脂 （2号） 高盐三糖铁琼脂（2.5%氯化钠） |
产品描述：
三糖铁琼脂培养基(Triple Sugar Iron Agar)简称TSI培养基，是一种肠杆菌鉴别性固体培养基。 《细菌学鉴定手册》给出了3种配方，但核心成分及其含量都相同。
本产品采用Medium NO.1配方。
TSI培养基的工作原理：
细菌的鉴别归根结底是根据该种细菌能够水解、利用那些化合物。TSI培养基的鉴别依据是肠杆菌发酵3种糖类（即葡萄糖、乳糖、蔗糖）的能力和H2S生成能力，或者 说是四种代谢反应：葡萄糖发酵、乳糖和（或）蔗糖发酵、硫化物（这里指硫化铁）生成、氨基酸氧化脱氨作用。
三糖铁琼脂培养基采用的是斜面培养法，即三糖铁斜面，提供两种氧气环境：有氧的培养基表面（斜面，slant）和缺少氧气的培养基 深处（试管底部，butt）。
葡萄糖发酵产酸量很少，只能影响局部的pH值。培养基中的葡萄糖含量很少，葡萄糖被耗尽后，不能发酵乳糖糖和蔗糖的肠杆菌继而以 蛋白胨为碳源。氨基酸氧化脱氨产生NH3，使培养基斜面处呈碱性。能够发酵乳糖和（或）蔗糖的肠杆菌在无氧条件下能够产大量的酸 ，使整个培养基呈酸性。有的菌种发酵糖类时还产气（主要为二氧化碳），表现为琼脂培养基出现断裂或有气泡。硫化氢在碱性条件下 与铁离子生成黑色沉淀——Fe2S3 ，使培养基变黑。但酸性条件下，Fe2S3不稳定，硫化氢则以气体形式被释放。因此对于快速产酸的 微生物，H2S生成可能被掩蔽。
酚红是酸碱指示剂，变色范围：pH6.6(黄色)~pH8.4(红色) 。中性条件下显红色，当pH>8.4，变成紫红色。
蔗糖有助于大肠菌的快速检测，鉴于其发酵蔗糖的速度高于发酵乳糖的速度。另外，某些革兰氏阴性菌不能够发酵乳糖，只能发酵蔗糖 。
硫代硫酸根离子为H2S生成反应提供底物。
铁盐（硫酸亚铁或柠檬酸铁铵）是H2S指示剂，与H2S反应生产黑色沉淀。培养基变黑证明有H2S生成。值得注意的是，对于TSI培养基来 说，这一结论的反向推论是不成立的，即培养基没有变黑并不能证明没有H2S生成。原因见上文。
牛肉提取物和酵母提取物为细菌生长提供微量元素和生长因子。氯化维持培养基的渗透压平衡。
蛋白胨作为主要氮源，也是非发酵型微生物的碳源。对于不能利用乳糖和蔗糖的微生物，当直接碳源葡萄糖耗尽后蛋白胨也作为碳源。
现象与解读
Triple Sugar Iron Agar培养基的用途：
Triple Sugar Iron Agar是食品药品监督局（FDA）和美国农业部（USDA）规定的检测食品中肠杆 菌科微生物用的培养基。
Triple Sugar Iron Agar用于鉴别大肠杆菌、肠杆菌科细菌、假单胞菌、沙门氏菌、志贺氏菌等。
Triple Sugar Iron Agar培养基配方与配制方法
| 培养基成分： | 含量：g/L |
|---|---|
| 混合蛋白胨 | 20.0 |
| 葡萄糖 | 1.0 |
| 乳糖 | 10.0 |
| 蔗糖 | 10.0 |
| 氯化钠 | 5.0 |
| 硫酸亚铁铵 | 0.2 |
| 硫代硫酸钠 | 0.2 |
| 酚红 | 0.025 |
| 琼脂 | 13.0 |
| pH |
7.3± 0.2 |
配制方法：
1. 称取脱水培养基59.4g，用1L去离子水重悬，浸泡10min。
2. 摇晃混匀，不断搅拌，煮沸1min使其完全溶解。分装到16X150mm试管中，液面高度为三分之一试管高度。使用棉塞或可透气的试管盖。
3. 121°C高温蒸汽灭菌15min。不要过度加热。
4. 在冷却过程中倾斜放置试管，制备4-5cm长斜面，管底高度2-3cm。
实验方法
接种方法与注意事项：
1. 将三糖铁琼脂制备成较短的斜面，使试管底部至斜面的距离增大，试管口用松散透气的棉塞塞住，不能堵死管口。以上处理的目的是获得缺氧与有氧两种培养环境。
2. 从选择性培养基上的单菌落中心处挑菌（越靠菌落中心的细胞越年轻），先用接种针穿刺接种到试管底部（必须接种到最底部，否则结果无效），抽出接种针，在斜面上划线接种。
3. 将接种后的试管置于培养箱中，35-37ºC，有氧，培养18-24h。观察结果。
结果与分析：
标准菌株在TSI培养基上的生长情况如下：
标准菌株 拉丁名称 ATCC编号 斜面 管底 产气 H2S
大肠杆菌 Escherichia coli ATCC8739 A A + -
变形杆菌 Proteus hauseri ATCC13315 A A + +
绿脓杆菌 Pseudomonas aeruginosa ATCC9027 K K - -
肠炎沙门氏菌 Salmonella enteritidis ATCC13076 K K + +
食品中沙门氏菌的分离与鉴别实验流程
