| 培养基名称 | LES远藤氏琼脂 |
|---|---|
| 英文名称: | m Endo Agar LES，LES Endo Agar |
| 培养基类型: | 鉴别培养基 |
| 产品目录号: | M741-01 |
| 产品规格: | 250g |
| 保存条件: | 密封，阴凉干燥处保存。制备好的培养基2-8°C避光保存。 |
| 产品性状: |
麦秸色至浅棕红色粉末。 棕红色凝胶。 |
| 注意事项: | 避免摄入、呼入、皮肤接触。配制时在通风橱中进行，戴口罩、手套、护目镜。 |
| 相关产品: | 远藤氏琼脂（Endo Agar） |
产品描述：
LES远藤氏琼脂（LES Endo Agar）是两步滤膜法检测水中大肠菌群用的鉴别培养基。LES远藤氏琼脂是由McCarthy、Delaney 和 Grasso1开发的，作为两步滤膜法检测水中的大肠菌群的二次增菌培养基，月桂基硫酸盐胰蛋白月示肉汤（Lauryl Tryptose Broth）是初步增菌培养基。两步法较之使用m远藤氏肉汤（m Endo Broth）的一步法回收率更高。美国公共卫生协会（APHA）明确规定使用LES远藤氏肉汤用于滤膜法检测饮用水和瓶装水中大肠菌群总数。
本产品配方采用《细菌学分析手册》标准配方。
LES远藤氏琼脂培养基工作原理
LES远藤氏琼脂培养基中含有多种蛋白胨提供碳源、氮源、维生素和矿物质。酵母提取物提供B族维生素，刺激细菌生长。磷酸盐作为pH缓冲系统，氯化钠维持渗透压平衡。碱性品红是酸碱指示剂。培养基中亚硫酸钠和品红对革兰氏阳性菌有弱抑制作用。加入20ml非变性乙醇可以提高该培养基的抑菌性。乳糖是可发酵的糖类。亚硫酸盐可以使碱性品红脱色。乳糖发酵型大肠杆菌和大肠菌群产生乙醛和酸。乙醛与亚硫酸品红化合物反应，释放出品红，使菌落和周围培养基变红色。对于E.coli，该反应过于强烈，使得品红结晶析出，给予菌落永久性的金色金属光泽。非乳糖发酵菌和乳糖发酵能力较弱的E.coli菌落透明无色，不具有金色金属光泽。如果接种量过大，金属光泽将被掩蔽。红色至黑红色菌落，带有金-绿色金属光泽是大肠菌的特征。
大多数革兰氏阴性菌在该培养基上生长良好，而革兰氏阳性菌被抑制。乳糖发酵型大肠菌群在远藤氏琼脂平板上产生红色至深红色菌落，带有金色金属光泽，而非乳糖发酵型微生物产生无色透明菌落，如沙门氏菌。
LES远藤氏琼脂培养基的用途：
LES远藤氏琼脂（Endo Agar LES）用于滤膜法增菌食品中的大肠菌群。
LES远藤氏琼脂可以用于一步滤膜法、两步滤膜法和延迟培养滤膜法，增菌水中的大肠菌群。
美国公共卫生协会（APHA）明确规定使用LES远藤氏肉汤用于滤膜法检测饮用水和瓶装水中大肠菌群总数。
LES远藤氏琼脂培养基配方与配制方法
| 培养基成分： | 含量：/L |
|---|---|
| 酪蛋白胨 | 3.7 g |
| 肉蛋白胨/th> | 3.7 g |
| 胰蛋白月示 | 7.5 g |
| 酵母提取物 | 1.2 g |
| 乳糖 | 9.4 g |
| 氯化钠 | 3.7 g |
| 磷酸氢二钾 | 3.3 g |
| 磷酸二氢钾 | 1.0 g |
| 十二烷基硫酸钠(SDS) | 0.05 g |
| 脱氧胆酸钠 | 0.1 g |
| 亚硫酸钠 | 1.6 g |
| 碱性品红 | 0.8 g |
| 琼脂 | 15.0 g |
| 终溶液pH | 7.2± 0.2 |
配制方法：
1. 称取51.05g本产品，用1L纯水（含20ml 95%乙醇）重悬。不要使用变性乙醇。
2. 加热至接近煮沸使其完全溶解。然后迅速停止加热，使其冷却至45-50°C。
3. 分装5-7ml的量到60mm无菌培养皿中。如果使用其它规格的培养皿，相应地调节分装量，以便获得理想的琼脂深度4-5mm。
不要用灭菌锅灭菌。有不溶性沉淀产生是正常的，不影响使用效果。配制好的培养基放入冰箱中避光保存，可保存2周。
实验方法
1. 在培养皿盖内侧放置一个滤膜吸水垫。
2. 每个吸水垫加入1.8-2.0ml 十二烷基（月桂基）硫酸盐胰蛋白月示肉汤。
3. 使待测水样通过滤膜。
4. 将滤膜上面朝上，放置在含有培养基的吸水垫上。注意不要产生气泡。
5. 35 ± 0.5°C培养1.5-2.5h。将滤膜转移到LES远藤氏琼脂表面，使有细菌的一面超上。
6. 将吸水垫留在培养皿盖子里，将平板倒置。35 ± 0.5°C培养22 ± 2h。
7. 计数所有红色带金属光泽的菌落。
Single-Step Method:
1. Filter the water sample through a 0.45um membrane filter.
2. Place the membrane on the surface of the agar, filtered side up, using a rolling motion to assure proper contact with the surface and to avoid entrapment of air bubbles.
3. Incubate plates at 35 +/- 0.5ºC. for 24 +/- 2.0 hours.
4. Observe for the presence of red colonies with a golden-green metallic sheen.
Two-Step Method:
1. Invert a plate of m Endo LES Agar and insert an absorbent filter pad in the lid of the plate.
2. Pipet 1.8 to 2.2ml of Lauryl Sulfate Broth (Cat. no. K33) to the filter pad. Remove excess fluid.
3. Run the water sample through the membrane filter.
4. With the top side of the filter up, apply a membrane filter, through which a water sample has been filtered, to the membrane filter pad. Apply the membrane filter using a rolling motion to avoid entrapment of air bubbles.
5. Incubate, in a humid (at least 60%) atmosphere, at 35 +/- 0.5ºC. for a period of 2 hours +/- 0.5 hours.
6. Following incubation, strip the membrane filter from the pad and, using a rolling motion, place the filter face up on the surface of the m Endo LES Agar.
7. Reincubate the plate at 35 +/- 0.5ºC. for 24 hours.
8. Observe for the presence of red colonies with a golden-green metallic sheen.
结果与分析
所有红色菌落带有金色金属光泽微生物被认为是大肠菌。金属光泽可能覆盖整个培养基，也可能只存在于菌落中心或菌落边缘。偶尔非大肠菌也产生带金属光泽的菌落。大肠菌群也偶尔产生非特征性菌落（深红色或呈核状，无金属光泽）。建议对这两种菌落进行进一步验证。
ATCC标准菌株在LES远藤氏琼脂培养基上的生长情况如下：
