出品公司: | Promega |
---|---|
载体名称: | pNLF1-secN ; pNLF1-secN [CMV/Hygro] |
质粒类型: | 哺乳动物载体;NanoLuc素酶报告载体 |
高拷贝/低拷贝: | -- |
克隆方法: | 限制性内切酶,多克隆位点 |
启动子: | CMV IE |
载体大小: | 6005 bp |
5' 测序引物及序列: | T7 Forward:TAATACGACTCACTATAGGG |
3' 测序引物及序列: | -- |
载体标签: | NanoLuc |
载体抗性: | 氨苄青霉素 |
筛选标记: | 潮霉素(Hygromycin) |
克隆菌株: | TOP10等常规菌株 |
宿主细胞(系): | 常规哺乳动物细胞等 |
备注: | pNLF1-secN [CMV/Hygro]载体表达NanoLuc融合蛋白;NanoLuc萤光素酶(Nluc)更小(19.1kDa)、更亮(比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍)。 |
产品目录号: | N1371 |
稳定性: | 瞬表达或稳表达 |
组成型/诱导型: | 组成型 |
病毒/非病毒: | 非病毒 |
买家导航
pNLF1-secN [CMV/Hygro]载体质粒基本信息
pNLF1-secN [CMV/Hygro]质粒图谱载体图谱和pNLF1-secN [CMV/Hygro]载体序列质粒序列多克隆位点信息
pNLF1-secN [CMV/Hygro] Vector sequence reference points:
Base pairs 6005
CMV immediate early enhancer/promoter 1–742
Chimeric intron 857–989
T7 RNA polymerase promoter 1033–1052
secNanoLuc® protein coding region 1067–1663
Linker 1664–1675
Multiple cloning region 1676–1751
SV40 late poly(A) region 1814–2035
SV40 early enhancer/promoter 2134–2546
Synthetic hygromycin (Hygr) coding region 2577–3614
Synthetic poly(A) signal 3638–3686
β-lactamase (Ampr) coding region 3947–4807
ColE1-derived plasmid replication origin 4962–4998
pNLF1-secN [CMV/Hygro]质粒载体简介
NanoLuc萤光素酶融合表达载体pNLF1-secN 更小(19.1kDa)、更亮(比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍)的 NanoLuc萤光素酶(Nluc)非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛:作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像(BLI)探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移(BRET)研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。 NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白;有两类形式载体可供选择: pNLF 载体系列:产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法(多克隆位点)将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。 pF 载体系列:使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白;Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法,基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI,可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列,快速、高效和高保真。 特点 - 优点 轻松定量蛋白丰度变化:使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样,来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号,进而检测细胞内蛋白水平。 生物相关性更高:NanoLuc 报告基因光信号更强,内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到,可避免过度表达造成的假象。 使蛋白的细胞内动态变化可视化:NanoLuc 报告基因光信号更强,缩短了成像曝光时间,无需反复激发样本,从而降低了激发造成的细胞毒性反应。 改进 BRET 研究技术:NanoLuc 拥有更强的光信号,蓝移的发射光谱,因而与荧光受体的光谱交叉更少,信噪比更佳,动态范围更宽。 灵活的克隆选择:可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。 可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡:所有载体都含有用于建立稳定细胞系的哺乳动物筛选标志物。 应用 化合物筛选 蛋白: 蛋白相互作用 蛋白: 小分子相互作用 生物发光成像 蛋白稳定性研究
pNLF1-secN [CMV/Hygro]质粒序列载体序列
LOCUS KF811459 6005 bp DNA circular SYN 03-FEB-2014 DEFINITION SecN CMV-Hyg Vector pNLF1, complete sequence. ACCESSION KF811459 VERSION KF811459.1 GI:576890577 KEYWORDS . SOURCE secN CMV-Hyg Vector pNLF1 ORGANISM secN CMV-Hyg Vector pNLF1 other sequences; artificial sequences; vectors. REFERENCE 1 (bases 1 to 6005) AUTHORS McNamara,B., Kopish,K. and Robers,M. TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (06-NOV-2013) Scientific Communications, Promega Corporation, 5500 E. Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, USA FEATURES Location/Qualifiers source 1..6005 /organism="secN CMV-Hyg Vector pNLF1" /mol_type="other DNA" /db_xref="taxon:1454403" regulatory 1..6005 /regulatory_class="promoter" /note="CMV promoter" intron 857..989 /note="chimeric" regulatory 1033..1052 /regulatory_class="promoter" /note="T7 promoter" CDS 1067..>1663 /note="N-terminus" /codon_start=1 /transl_table=11 /product="NanoLuc luciferase" /protein_id="AHH41365.1" /db_xref="GI:576890580" /translation="MNSFSTSAFGPVAFSLGLLLVLPAAFPAPVFTLEDFVGDWRQTA GYNLDQVLEQGGVSSLFQNLGVSVTPIQRIVLSGENGLKIDIHVIIPYEGLSGDQMGQ IEKIFKVVYPVDDHHFKVILHYGTLVIDGVTPNMIDYFGRPYEGIAVFDGKKITVTGT LWNGNKIIDERLINPDGSLLFRVTINGVTGWRLCERILA" misc_feature 1067..1153 /note="IL6 signal sequence" misc_feature 1664..1675 /note="N-terminal NanoLuc linker" misc_feature 1676..1751 /note="multiple cloning region" misc_feature 1676..1683 /note="SgfI site" misc_feature 1695..1700 /note="EcoICRI site" regulatory 1814..2035 /regulatory_class="polyA_signal_sequence" /note="SV40 late polyA signal" regulatory 2134..2546 /regulatory_class="promoter" /note="SV40 early enhancer/promoter" gene 2577..3614 /gene="hygR" CDS 2577..3614 /gene="hygR" /codon_start=1 /transl_table=11 /product="hygromycin resistance protein" /protein_id="AHH41364.1" /db_xref="GI:576890579" /translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGR GYVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQD LPETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVY HWQTVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWS EAMFGDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQ SLVDGNFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPS TRPRAKEVGRV" regulatory 3638..3686 /regulatory_class="polyA_signal_sequence" /note="synthetic polyA signal" gene 3947..4807 /gene="ampR" CDS 3947..4807 /gene="ampR" /function="resistance to ampicillin" /note="ampicillin-resistance protein" /codon_start=1 /transl_table=11 /product="beta-lactamase" /protein_id="AHH41363.1" /db_xref="GI:576890578" /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA EIGASLIKHW" rep_origin 4962..4998 /note="ColE1-derived plasmid replication origin" ORIGIN 1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta 61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc 121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg 181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc 241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat 301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc 361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga 421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg 481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac 541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt 601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc 661 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc 721 tggtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat 781 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc 841 gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa 901 actgggcttg tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac 961 tgacatccac tttgcctttc tctccacagg tgtccactcc cagttcaatt acagctctta 1021 aggctagagt attaatacga ctcactatag ggctagcaaa gccaccatga actccttctc 1081 cacaagcgcc ttcggtccag ttgccttctc cctgggcctg ctcctggtgt tgcctgctgc 1141 cttccctgcc ccagtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac agacagccgg 1201 ctacaacctg gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg 1261 ggtgtccgta actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga 1321 catccatgtc atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa 1381 aatttttaag gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg 1441 cacactggta atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga 1501 aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa 1561 caaaattatc gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat 1621 caacggagtg accggctggc ggctgtgcga acgcattctg gcgggctcga gcggcgcgat 1681 cgcttccgaa ttcagagctc aaccgcggat atctagattt gggcccaatt cctgcaggat 1741 tttgcggccg cttgctgagt tggctgctgc caccgctgag caataactag cataacccct 1801 tggccgcttc gagcagacat gataagatac attgatgagt ttggacaaac cacaactaga 1861 atgcagtgaa aaaaatgctt tatttgtgaa atttgtgatg ctattgcttt atttgtaacc 1921 attataagct gcaataaaca agttaacaac aacaattgca ttcattttat gtttcaggtt 1981 cagggggaga tgtgggaggt ttttttaagc aagtaaaacc tctacaaatg tggtaaaatc 2041 gaattttaac aaaatattaa cgcttacaat ttcctgatgc ggtattttct ccttacgcat 2101 ctgtgcggta tttcacaccg catacgcgga tctgcgcagc accatggcct gaaataacct 2161 ctgaaagagg aacttggtta ggtaccttct gaggcggaaa gaaccagctg tggaatgtgt 2221 gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc 2281 atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta 2341 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc 2401 cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta atttttttta 2461 tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct 2521 tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc tcgattcttc tgacactagc gccaccatga 2581 agaagcccga actcaccgct accagcgttg aaaaatttct catcgagaag ttcgacagtg 2641 tgagcgacct gatgcagttg tcggagggcg aagagagccg agccttcagc ttcgatgtcg 2701 gcggacgcgg ctatgtactg cgggtgaata gctgcgctga tggcttctac aaagaccgct 2761 acgtgtaccg ccacttcgcc agcgctgcac tacccatccc cgaagtgttg gacatcggcg 2821 agttcagcga gagcctgaca tactgcatca gtagacgcgc ccaaggcgtt actctccaag 2881 acctccccga aacagagctg cctgctgtgt tacagcctgt cgccgaagct atggatgcta 2941 ttgccgccgc cgacctcagt caaaccagcg gcttcggccc attcgggccc caaggcatcg 3001 gccagtacac aacctggcgg gatttcattt gcgccattgc tgatccccat gtctaccact 3061 ggcagaccgt gatggacgac accgtgtccg ccagcgtagc tcaagccctg gacgaactga 3121 tgctgtgggc cgaagactgt cccgaggtgc gccacctcgt ccatgccgac ttcggcagca 3181 acaacgtcct gaccgacaac ggccgcatca ccgccgtaat cgactggtcc gaagctatgt 3241 tcggggacag tcagtacgag gtggccaaca tcttcttctg gcggccctgg ctggcttgca 3301 tggagcagca gactcgctac ttcgagcgcc ggcatcccga gctggccggc agccctcgtc 3361 tgcgagccta catgctgcgc atcggcctgg atcagctcta ccagagcctc gtggacggca 3421 acttcgacga tgctgcctgg gctcaaggcc gctgcgatgc catcgtccgc agcggggccg 3481 gcaccgtcgg tcgcacacaa atcgctcgcc ggagcgcagc cgtatggacc gacggctgcg 3541 tcgaggtgct ggccgacagc ggcaaccgcc ggcccagtac acgaccgcgc gctaaggagg 3601 taggtcgagt ttagactcta gccatcacga tggccgcaat aaaatatctt tattttcatt 3661 acatctgtgt gttggttttt tgtgtgaatc gatagcgata aggatcctct ttgcgcttgc 3721 gttttccctt gtccagatag cccagtagct gacattcatc cggggtcagc accgtttctg 3781 cggactggct ttctacgtaa tggtttctta gacgtcaggt ggcacttttc ggggaaatgt 3841 gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag 3901 acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca 3961 tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc 4021 agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat 4081 cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc 4141 aatgatgagc actttcaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta ttgacgccgg 4201 gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc 4261 agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat 4321 aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca actatcggag gaccgaagga 4381 gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc 4441 ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg tagcaatggc 4501 aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc ggcaacaatt 4561 aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc 4621 tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc 4681 agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga cggggagtca 4741 ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca 4801 ttggtaattc gaaatgaccg accaagcgac gcccaaccgg tatcagctca ctcaaaggcg 4861 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc 4921 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc 4981 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga 5041 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc 5101 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat 5161 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg 5221 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc 5281 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga 5341 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact 5401 agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt 5461 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag 5521 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggattt caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg 5581 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa 5641 aggatcttca cctagatcct tttatagtcc ggaaatacag gaacgcacgc tggatggccc 5701 ttcgctggga tggtgaaacc atgaaaaatg gcagcttcag tggattaagt gggggtaatg 5761 tggcctgtac cctctggttg cataggtatt catacggtta aaatttatca ggcgcgattg 5821 cggcagtttt tcgggtggtt tgttgccatt tttacctgtc tgctgccgtg atcgcgctga 5881 acgcgtttta gcggtgcgta caattaaggg attatggtaa atccacttac tgtctgccct 5941 cgtagccatc gagataaacc gcagtactcc ggccacgatg cgtccggcgt agaggatcga 6001 gatct //