| 出品公司: | Takara |
|---|---|
| 载体名称: | pCold I, pColdI, pCold1, pCold-I |
| 质粒类型: | 大肠杆菌蛋白表达载体 |
| 表达水平: | 高 |
| 启动子: | CSPA |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 4407 bp |
| 5' 测序引物及序列: | pCold-F: 5'-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3' |
| 3' 测序引物及序列: | pCold-R: 5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3' |
| 载体标签: | N-His, N-Factor Xa |
| 载体抗性: | Ampicillin 氨苄 |
| 备注: |
温度诱导，冷休克蛋白表达载体
|
| 产品目录号: | 3361 |
| 稳定性: | 瞬时表达 Transient |
| 组成型: | 诱导表达 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
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pCold I载体 pColdI pCold1质粒基本信息
pCold I质粒图谱 pColdI pCold1载体图谱和pCold I载体序列 pColdI pCold1质粒序列多克隆位点信息
pCold I质粒 pColdI pCold1载体简介
阐明蛋白质的结构和功能是后基因组研究的一个重要课题。高效率的蛋白质表达系统是研究这些课题的不可缺少的基本技术。大肠杆菌作为宿主的表达系统中被广泛使用于生产重组蛋白。大肠杆菌表达系统具有良好的优势,方法简单，成本低。然而，对于某些基因，蛋白表达很困难，表达的蛋白质不溶。
为了解决这些问题，TAKARA与Masayori Inouye教授（美国新泽西医学和牙科大学）进行联合研究，以制定一个高效基于低温冷休克蛋白基因的大肠杆菌表达载体。pCold DNA系列产品具有上述的优点，并提供了一个重要功能和结构的分析以及其他蛋白质研究领域的工具。
<产品概况和特点>
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。
冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5'非翻译区（5'UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。
pCold I质粒序列 pColdI pCold1载体序列
LOCUS pCold\I 4407 bp DNA circular SYN 10-AUG-2004
DEFINITION Expression vector pColdI DNA, complete sequence.
ACCESSION AB186388
VERSION AB186388.1 GI:51090247
KEYWORDS .
SOURCE Expression vector pColdI
ORGANISM Expression vector pColdI
other sequences; artificial sequences; vectors.
COMMENT This file is created by Vector NTI
http://www.biofeng.com/
COMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4407
/organism="Expression vector pColdI"
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:289229"
/lab_host="Escherichia coli"
/note="expresses an open reading frame as a factor Xa
cleavable fusion to a His6 containing translation
enhancing element. This plasmid is derived from pUC118."
gene 15..512
/gene="cspA"
promoter 15..81
/gene="cspA"
misc_feature 82..121
/gene="cspA"
/note="synthetic lac operator sequence"
5'UTR 122..255
/gene="cspA"
/note="modified cspA 5'UTR"
misc_feature 256..270
/gene="cspA"
/note="TEE (translation enhancing element)"
misc_feature 271..288
/gene="cspA"
/note="His6 tag"
misc_feature 289..300
/gene="cspA"
/note="Factor Xa site"
misc_feature 301..360
/gene="cspA"
/note="MCS = Multiple cloning sites contain the follow
restriction sites: NdeI, SacI, KpnI, XhoI, BamHI, EcoRI,
HindIII, SalI, PstI, XbaI"
3'UTR 368..512
/gene="cspA"
/note="cspA 3'UTR"
misc_feature complement(711..1184)
/note="M13 intergenic region"
gene 1371..2231
/gene="Amp"
CDS 1371..2231
/gene="Amp"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="beta-lactamase"
/protein_id="BAD35134.1"
/db_xref="GI:51090248"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW"
rep_origin 2391..3005
/note="ColE1 origin"
gene complement(3162..4244)
/gene="lacI"
CDS complement(3162..4244)
/gene="lacI"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="lactose operon repressor"
/protein_id="BAD35135.1"
/db_xref="GI:51090249"
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAE
LNYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERS
GVEACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSII
FSHEDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREG
DWSAMSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDT
EDSSCYIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNT
QTASPRALADSLMQLARQVSRLESGQ"
ORIGIN
1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcatat cgaaggtagg
301 catatggagc tcggtaccct cgagggatcc gaattcaagc ttgtcgacct gcagtctaga
361 taggtaatct ctgcttaaaa gcacagaatc taagatccct gccatttggc ggggattttt
421 ttatttgttt tcaggaaata aataatcgat cgcgtaataa aatctattat tatttttgtg
481 aagaataaat ttgggtgcaa tgagaatgcg caggcccttt cgtctcgcgc gtttcggtga
541 tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc
601 ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg
661 ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga gtgcaccata aaattgtaaa
721 cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca
781 ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagcccgaga tagggttgag
841 tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg
901 gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccca aatcaagttt
961 tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag
1021 agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc
1081 gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc
1141 gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtacta tggttgcttt gacgtatgcg gtgtgaaata
1201 ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgtc aggtggcact tttcggggaa
1261 atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca
1321 tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc
1381 aacatttccg tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc
1441 acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt
1501 acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt
1561 ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg
1621 ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact
1681 caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg
1741 ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga
1801 aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg
1861 aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa
1921 tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac
1981 aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc
2041 cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca
2101 ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga
2161 gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta
2221 agcattggta actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc
2281 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc
2341 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt
2401 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac
2461 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct
2521 tcagcagagc gcagatacca aatactgttc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact
2581 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg
2641 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata
2701 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga
2761 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag
2821 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg
2881 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac
2941 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca
3001 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacata gtcatgcccc
3061 gcgcccaccg gaaggagctg actgggttga aggctctcaa gggcatcggt cgagatcccg
3121 gtgcctaatg agtgagctaa cttacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt
3181 cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt
3241 tgcgtattgg gcgccagggt ggtttttctt ttcaccagtg agacgggcaa cagctgattg
3301 cccttcaccg cctggccctg agagagttgc agcaagcggt ccacgctggt ttgccccagc
3361 aggcgaaaat cctgtttgat ggtggttaac ggcgggatat aacatgagct gtcttcggta
3421 tcgtcgtatc ccactaccga gatatccgca ccaacgcgca gcccggactc ggtaatggcg
3481 cgcattgcgc ccagcgccat ctgatcgttg gcaaccagca tcgcagtggg aacgatgccc
3541 tcattcagca tttgcatggt ttgttgaaaa ccggacatgg cactccagtc gccttcccgt
3601 tccgctatcg gctgaatttg attgcgagtg agatatttat gccagccagc cagacgcaga
3661 cgcgccgaga cagaacttaa tgggcccgct aacagcgcga tttgctggtg acccaatgcg
3721 accagatgct ccacgcccag tcgcgtaccg tcttcatggg agaaaataat actgttgatg
3781 ggtgtctggt cagagacatc aagaaataac gccggaacat tagtgcaggc agcttccaca
3841 gcaatggcat cctggtcatc cagcggatag ttaatgatca gcccactgac gcgttgcgcg
3901 agaagattgt gcaccgccgc tttacaggct tcgacgccgc ttcgttctac catcgacacc
3961 accacgctgg cacccagttg atcggcgcga gatttaatcg ccgcgacaat ttgcgacggc
4021 gcgtgcaggg ccagactgga ggtggcaacg ccaatcagca acgactgttt gcccgccagt
4081 tgttgtgcca cgcggttggg aatgtaattc agctccgcca tcgccgcttc cactttttcc
4141 cgcgttttcg cagaaacgtg gctggcctgg ttcaccacgc gggaaacggt ctgataagag
4201 acaccggcat actctgcgac atcgtataac gttactggtt tcacattcac caccctgaat
4261 tgactctctt ccgggcgcta tcatgccata ccgcgaaagg ttttgcgcca ttcgatggtg
4321 tccgggatct cgacgctctc ccttatgcga ctcctgcatt aggaagcagc ccagtagtag
4381 gttgaggccg ttgagcaccg ccgccgc
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