| 出品公司: | Takara |
|---|---|
| 载体名称: | pCold IV, pColdIV, pCold-IV |
| 质粒类型: | 大肠杆菌蛋白表达载体 |
| 表达水平: | 高 |
| 启动子: | CSPA |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 4359 bp |
| 5' 测序引物及序列: | pCold-F: 5'-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3' |
| 3' 测序引物及序列: | pCold-R: 5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3' |
| 载体标签: | / |
| 载体抗性: | Ampicillin 氨苄 |
| 备注: |
温度诱导，冷休克蛋白表达载体
|
| 产品目录号: | 3364 |
| 稳定性: | 瞬时表达 Transient |
| 组成型: | 诱导表达 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
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pCold IV载体 pColdIV质粒基本信息
pCold IV质粒图谱 pColdIV载体图谱和pCold IV载体序列 pColdIV质粒序列多克隆位点信息
pCold IV质粒 pColdIV载体简介
阐明蛋白质的结构和功能是后基因组研究的一个重要课题。高效率的蛋白质表达系统是研究这些课题的不可缺少的基本技术。大肠杆菌作为宿主的表达系统中被广泛 使用于生产重组蛋白。大肠杆菌表达系统具有良好的优势,方法简单，成本低。然而，对于某些基因，蛋白表达很困难，表达的蛋白质不溶。
为了解决这些问题，TAKARA与Masayori Inouye教授（美国新泽西医学和牙科大学）进行联合研究，以制定一个高效基于低温冷休克蛋白基因的大肠杆菌表达载体。pCold DNA系列产品具有上述的优点，并提供了一个重要功能和结构的分析以及其他蛋白质研究领域的工具。
<产品概况和特点>
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。
冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5'非翻译区（5'UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因 子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的 pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。
pCold IV质粒序列 pColdIV载体序列
LOCUS pCold\IV 4359 bp DNA circular SYN 10-AUG-2004
DEFINITION Expression vector pColdIV DNA, complete sequence.
ACCESSION AB186391
VERSION AB186391.1 GI:51090256
KEYWORDS .
SOURCE Expression vector pColdIV
ORGANISM Expression vector pColdIV
other sequences; artificial sequences; vectors.
COMMENT This file is created by Vector NTI
http://www.biofeng.com/
COMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4359
/organism="Expression vector pColdIV"
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:289232"
/lab_host="Escherichia coli"
/note="expresses an open reading frame directly. This
plasmid is derived from pUC118."
gene 15..464
/gene="cspA"
promoter 15..81
/gene="cspA"
misc_feature 82..121
/gene="cspA"
/note="synthetic lac operator sequence"
5'UTR 122..255
/gene="cspA"
/note="modified cspA 5'UTR"
misc_feature 253..312
/gene="cspA"
/note="MCS = Multiple cloning sites contain the follow
restriction sites: NdeI, SacI, KpnI, XhoI, BamHI, EcoRI,
HindIII, SalI, PstI, XbaI"
3'UTR 320..464
/gene="cspA"
/note="cspA 3'UTR"
misc_feature complement(663..1136)
/note="M13 intergenic region"
gene 1323..2183
/gene="Amp"
CDS 1323..2183
/gene="Amp"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="beta-lactamase"
/protein_id="BAD35140.1"
/db_xref="GI:51090257"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW"
rep_origin 2343..2957
/note="ColE1 origin"
gene complement(3114..4196)
/gene="lacI"
CDS complement(3114..4196)
/gene="lacI"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="lactose operon repressor"
/protein_id="BAD35141.1"
/db_xref="GI:51090258"
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAE
LNYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERS
GVEACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSII
FSHEDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREG
DWSAMSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDT
EDSSCYIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNT
QTASPRALADSLMQLARQVSRLESGQ"
ORIGIN
1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
241 aagaggtaat accatatgga gctcggtacc ctcgagggat ccgaattcaa gcttgtcgac
301 ctgcagtcta gataggtaat ctctgcttaa aagcacagaa tctaagatcc ctgccatttg
361 gcggggattt ttttatttgt tttcaggaaa taaataatcg atcgcgtaat aaaatctatt
421 attatttttg tgaagaataa atttgggtgc aatgagaatg cgcaggccct ttcgtctcgc
481 gcgtttcggt gatgacggtg aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc
541 ttgtctgtaa gcggatgccg ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg
601 cgggtgtcgg ggctggctta actatgcggc atcagagcag attgtactga gagtgcacca
661 taaaattgta aacgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
721 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagcccga
781 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
841 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
901 caaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
961 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
1021 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
1081 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtac tatggttgct ttgacgtatg
1141 cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg tcaggtggca
1201 cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt tttctaaata cattcaaata
1261 tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga
1321 gtatgagtat tcaacatttc cgtgtcgccc ttattccctt ttttgcggca ttttgccttc
1381 ctgtttttgc tcacccagaa acgctggtga aagtaaaaga tgctgaagat cagttgggtg
1441 cacgagtggg ttacatcgaa ctggatctca acagcggtaa gatccttgag agttttcgcc
1501 ccgaagaacg ttttccaatg atgagcactt ttaaagttct gctatgtggc gcggtattat
1561 cccgtattga cgccgggcaa gagcaactcg gtcgccgcat acactattct cagaatgact
1621 tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc atcttacgga tggcatgaca gtaagagaat
1681 tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata acactgcggc caacttactt ctgacaacga
1741 tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt tgcacaacat gggggatcat gtaactcgcc
1801 ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag ccataccaaa cgacgagcgt gacaccacga
1861 tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca aactattaac tggcgaacta cttactctag
1921 cttcccggca acaattaata gactggatgg aggcggataa agttgcagga ccacttctgc
1981 gctcggccct tccggctggc tggtttattg ctgataaatc tggagccggt gagcgtgggt
2041 ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag atggtaagcc ctcccgtatc gtagttatct
2101 acacgacggg gagtcaggca actatggatg aacgaaatag acagatcgct gagataggtg
2161 cctcactgat taagcattgg taactgtcag accaagttta ctcatatata ctttagattg
2221 atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga tctaggtgaa gatccttttt gataatctca
2281 tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga
2341 tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa
2401 aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact ctttttccga
2461 aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt tcttctagtg tagccgtagt
2521 taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt
2581 taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat
2641 agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct
2701 tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagctatga gaaagcgcca
2761 cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag
2821 agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc
2881 gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga
2941 aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca
3001 tagtcatgcc ccgcgcccac cggaaggagc tgactgggtt gaaggctctc aagggcatcg
3061 gtcgagatcc cggtgcctaa tgagtgagct aacttacatt aattgcgttg cgctcactgc
3121 ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg
3181 ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgccagg gtggtttttc ttttcaccag tgagacgggc
3241 aacagctgat tgcccttcac cgcctggccc tgagagagtt gcagcaagcg gtccacgctg
3301 gtttgcccca gcaggcgaaa atcctgtttg atggtggtta acggcgggat ataacatgag
3361 ctgtcttcgg tatcgtcgta tcccactacc gagatatccg caccaacgcg cagcccggac
3421 tcggtaatgg cgcgcattgc gcccagcgcc atctgatcgt tggcaaccag catcgcagtg
3481 ggaacgatgc cctcattcag catttgcatg gtttgttgaa aaccggacat ggcactccag
3541 tcgccttccc gttccgctat cggctgaatt tgattgcgag tgagatattt atgccagcca
3601 gccagacgca gacgcgccga gacagaactt aatgggcccg ctaacagcgc gatttgctgg
3661 tgacccaatg cgaccagatg ctccacgccc agtcgcgtac cgtcttcatg ggagaaaata
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3841 acgcgttgcg cgagaagatt gtgcaccgcc gctttacagg cttcgacgcc gcttcgttct
3901 accatcgaca ccaccacgct ggcacccagt tgatcggcgc gagatttaat cgccgcgaca
3961 atttgcgacg gcgcgtgcag ggccagactg gaggtggcaa cgccaatcag caacgactgt
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4321 gcccagtagt aggttgaggc cgttgagcac cgccgccgc
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