| 出品公司: | Promega |
|---|---|
| 载体名称: | pFN31A ; pFN31A Nluc-CMV-Hygro Flexi |
| 质粒类型: | 哺乳动物载体；NanoLuc素酶报告载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | -- |
| 克隆方法: | 限制性内切酶，多克隆位点 |
| 启动子: | CMV IE |
| 载体大小: | 6308 bp |
| 5' 测序引物及序列: | T7 Forward:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | NanoLuc |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | 潮霉素（Hygromycin） |
| 克隆菌株: | TOP10等常规菌株 |
| 宿主细胞（系）: | 常规哺乳动物细胞等 |
| 备注: | pFN31A-Nluc-CMV-Hygro-Flexi载体表达NanoLuc融合蛋白；NanoLuc萤光素酶（Nluc）更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）。 |
| 产品目录号: | N1311 |
| 稳定性: | 瞬表达或稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
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pFN31A Nluc-CMV-Hygro-Flexi载体pFN31A质粒基本信息
pFN31A Nluc-CMV-Hygro-Flexi质粒图谱pFN31A载体图谱和pFN31A Nluc-CMV-Hygro-Flexi载体序列pFN31A质粒序列多克隆位点信息
CMV immediate early enhancer/promoter 1–742
Chimeric intron 857–989
T7 RNA polymerase promoter (–17 to +3) 1033–1052
NanoLuc® protein coding region 1065–1577
Linker 1578–1589
SgfI 1590–1597
Barnase coding region 1621–1956
PmeI 1958–1965
SV40 late poly(A) region 2117–2338
SV40 early enhancer/promoter 2437–2849
Synthetic hygromycin (Hygr) coding region 2880–3917
Synthetic poly(A) signal 3941–3989
β-lactamase (Ampr) coding region 4250–5110
ColE1-derived plasmid replication origin 5265–5301
pFN31A Nluc-CMV-Hygro-Flexi质粒pFN31A载体简介
NanoLuc萤光素酶融合表达载体pFN31A 更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）的 NanoLuc萤光素酶（Nluc）非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛：作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像（BLI）探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移（BRET）研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。 NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白；有两类形式载体可供选择： pNLF 载体系列：产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法（多克隆位点）将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。 pF 载体系列：使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白；Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法，基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI，可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列，快速、高效和高保真。 特点 - 优点 轻松定量蛋白丰度变化：使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样，来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号，进而检测细胞内蛋白水平。 生物相关性更高：NanoLuc 报告基因光信号更强，内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到，可避免过度表达造成的假象。 使蛋白的细胞内动态变化可视化：NanoLuc 报告基因光信号更强，缩短了成像曝光时间，无需反复激发样本，从而降低了激发造成的细胞毒性反应。 改进 BRET 研究技术：NanoLuc 拥有更强的光信号，蓝移的发射光谱，因而与荧光受体的光谱交叉更少，信噪比更佳，动态范围更宽。 灵活的克隆选择：可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。 可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡：所有载体都含有用于建立稳定细胞系的哺乳动物筛选标志物。 应用 化合物筛选 蛋白: 蛋白相互作用 蛋白: 小分子相互作用 生物发光成像 蛋白稳定性研究
pFN31A Nluc-CMV-Hygro-Flexi质粒序列pFN31A载体序列
1 TCAATATTGG CCATTAGCCA TATTATTCAT TGGTTATATA GCATAAATCA
51 ATATTGGCTA TTGGCCATTG CATACGTTGT ATCTATATCA TAATATGTAC
101 ATTTATATTG GCTCATGTCC AATATGACCG CCATGTTGGC ATTGATTATT
151 GACTAGTTAT TAATAGTAAT CAATTACGGG GTCATTAGTT CATAGCCCAT
201 ATATGGAGTT CCGCGTTACA TAACTTACGG TAAATGGCCC GCCTGGCTGA
251 CCGCCCAACG ACCCCCGCCC ATTGACGTCA ATAATGACGT ATGTTCCCAT
301 AGTAACGCCA ATAGGGACTT TCCATTGACG TCAATGGGTG GAGTATTTAC
351 GGTAAACTGC CCACTTGGCA GTACATCAAG TGTATCATAT GCCAAGTCCG
401 CCCCCTATTG ACGTCAATGA CGGTAAATGG CCCGCCTGGC ATTATGCCCA
451 GTACATGACC TTACGGGACT TTCCTACTTG GCAGTACATC TACGTATTAG
501 TCATCGCTAT TACCATGGTG ATGCGGTTTT GGCAGTACAC CAATGGGCGT
551 GGATAGCGGT TTGACTCACG GGGATTTCCA AGTCTCCACC CCATTGACGT
601 CAATGGGAGT TTGTTTTGGC ACCAAAATCA ACGGGACTTT CCAAAATGTC
651 GTAATAACCC CGCCCCGTTG ACGCAAATGG GCGGTAGGCG TGTACGGTGG
701 GAGGTCTATA TAAGCAGAGC TGGTTTAGTG AACCGTCAGA TCACTAGAAG
751 CTTTATTGCG GTAGTTTATC ACAGTTAAAT TGCTAACGCA GTCAGTGCTT
801 CTGACACAAC AGTCTCGAAC TTAAGCTGCA GAAGTTGGTC GTGAGGCACT
851 GGGCAGGTAA GTATCAAGGT TACAAGACAG GTTTAAGGAG ACCAATAGAA
901 ACTGGGCTTG TCGAGACAGA GAAGACTCTT GCGTTTCTGA TAGGCACCTA
951 TTGGTCTTAC TGACATCCAC TTTGCCTTTC TCTCCACAGG TGTCCACTCC
1001 CAGTTCAATT ACAGCTCTTA AGGCTAGAGT ATTAATACGA CTCACTATAG
1051 GGCTAGCGCT CACCATGGTC TTCACACTCG AAGATTTCGT TGGGGACTGG
1101 CGACAGACAG CCGGCTACAA CCTGGACCAA GTCCTTGAAC AGGGAGGTGT
1151 GTCCAGTTTG TTTCAGAATC TCGGGGTGTC CGTAACTCCG ATCCAAAGGA
1201 TTGTCCTGAG CGGTGAAAAT GGGCTGAAGA TCGACATCCA TGTCATCATC
1251 CCGTATGAAG GTCTGAGCGG CGACCAAATG GGCCAGATCG AAAAAATTTT
1301 TAAGGTGGTG TACCCTGTGG ATGATCATCA CTTTAAGGTG ATCCTGCACT
1351 ATGGCACACT GGTAATCGAC GGGGTTACGC CGAACATGAT CGACTATTTC
1401 GGACGGCCGT ATGAAGGCAT CGCCGTGTTC GACGGCAAAA AGATCACTGT
1451 AACAGGGACC CTGTGGAACG GCAACAAAAT TATCGACGAG CGCCTGATCA
1501 ACCCCGACGG CTCCCTGCTG TTCCGAGTAA CCATCAACGG AGTGACCGGC
1551 TGGCGGCTGT GCGAACGCAT TCTGGCGGGC TCGAGCGGCG CGATCGCCAT
1601 GGAATAAGTA AGGAATCCAC ATGGCACAGG TTATCAACAC GTTTGACGGG
1651 GTTGCGGATT ATCTTCAGAC ATATCATAAG CTACCTGATA ATTACATTAC
1701 AAAATCAGAA GCACAAGCCC TCGGCTGGGT GGCATCAAAA GGGAACCTTG
1751 CAGACGTCGC TCCGGGGAAA AGCATCGGCG GAGACATCTT CTCAAACAGG
1801 GAAGGCAAAC TCCCGGGCAA AAGCGGACGA ACATGGCGTG AAGCGGATAT
1851 TAACTATACA TCAGGCTTCA GAAATTCAGA CCGGATTCTT TACTCAAGCG
1901 ACTGGCTGAT TTACAAAACA ACGGACCATT ATCAGACCTT TACAAAAATC
1951 AGATAATGTT TAAACGAATT CGGGCTCGGT ACCCGGGGAT CCTCTAGAGT
2001 CGACCTGCAG GCATGCAAGC TGATCCGGCT GCTAACAAAG CCCGAAAGGA
2051 AGCTGAGTTG GCTGCTGCCA CCGCTGAGCA ATAACTAGCA TAACCCCTTG
2101 GGGCGGCCGC TTCGAGCAGA CATGATAAGA TACATTGATG AGTTTGGACA
2151 AACCACAACT AGAATGCAGT GAAAAAAATG CTTTATTTGT GAAATTTGTG
2201 ATGCTATTGC TTTATTTGTA ACCATTATAA GCTGCAATAA ACAAGTTAAC
2251 AACAACAATT GCATTCATTT TATGTTTCAG GTTCAGGGGG AGATGTGGGA
2301 GGTTTTTTTA AGCAAGTAAA ACCTCTACAA ATGTGGTAAA ATCGAATTTT
2351 AACAAAATAT TAACGCTTAC AATTTCCTGA TGCGGTATTT TCTCCTTACG
2401 CATCTGTGCG GTATTTCACA CCGCATACGC GGATCTGCGC AGCACCATGG
2451 CCTGAAATAA CCTCTGAAAG AGGAACTTGG TTAGGTACCT TCTGAGGCGG
2501 AAAGAACCAG CTGTGGAATG TGTGTCAGTT AGGGTGTGGA AAGTCCCCAG
2551 GCTCCCCAGC AGGCAGAAGT ATGCAAAGCA TGCATCTCAA TTAGTCAGCA
2601 ACCAGGTGTG GAAAGTCCCC AGGCTCCCCA GCAGGCAGAA GTATGCAAAG
2651 CATGCATCTC AATTAGTCAG CAACCATAGT CCCGCCCCTA ACTCCGCCCA
2701 TCCCGCCCCT AACTCCGCCC AGTTCCGCCC ATTCTCCGCC CCATGGCTGA
2751 CTAATTTTTT TTATTTATGC AGAGGCCGAG GCCGCCTCGG CCTCTGAGCT
2801 ATTCCAGAAG TAGTGAGGAG GCTTTTTTGG AGGCCTAGGC TTTTGCAAAA
2851 AGCTCGATTC TTCTGACACT AGCGCCACCA TGAAGAAGCC CGAACTCACC
2901 GCTACCAGCG TTGAAAAATT TCTCATCGAG AAGTTCGACA GTGTGAGCGA
2951 CCTGATGCAG TTGTCGGAGG GCGAAGAGAG CCGAGCCTTC AGCTTCGATG
3001 TCGGCGGACG CGGCTATGTA CTGCGGGTGA ATAGCTGCGC TGATGGCTTC
3051 TACAAAGACC GCTACGTGTA CCGCCACTTC GCCAGCGCTG CACTACCCAT
3101 CCCCGAAGTG TTGGACATCG GCGAGTTCAG CGAGAGCCTG ACATACTGCA
3151 TCAGTAGACG CGCCCAAGGC GTTACTCTCC AAGACCTCCC CGAAACAGAG
3201 CTGCCTGCTG TGTTACAGCC TGTCGCCGAA GCTATGGATG CTATTGCCGC
3251 CGCCGACCTC AGTCAAACCA GCGGCTTCGG CCCATTCGGG CCCCAAGGCA
3301 TCGGCCAGTA CACAACCTGG CGGGATTTCA TTTGCGCCAT TGCTGATCCC
3351 CATGTCTACC ACTGGCAGAC CGTGATGGAC GACACCGTGT CCGCCAGCGT
3401 AGCTCAAGCC CTGGACGAAC TGATGCTGTG GGCCGAAGAC TGTCCCGAGG
3451 TGCGCCACCT CGTCCATGCC GACTTCGGCA GCAACAACGT CCTGACCGAC
3501 AACGGCCGCA TCACCGCCGT AATCGACTGG TCCGAAGCTA TGTTCGGGGA
3551 CAGTCAGTAC GAGGTGGCCA ACATCTTCTT CTGGCGGCCC TGGCTGGCTT
3601 GCATGGAGCA GCAGACTCGC TACTTCGAGC GCCGGCATCC CGAGCTGGCC
3651 GGCAGCCCTC GTCTGCGAGC CTACATGCTG CGCATCGGCC TGGATCAGCT
3701 CTACCAGAGC CTCGTGGACG GCAACTTCGA CGATGCTGCC TGGGCTCAAG
3751 GCCGCTGCGA TGCCATCGTC CGCAGCGGGG CCGGCACCGT CGGTCGCACA
3801 CAAATCGCTC GCCGGAGCGC AGCCGTATGG ACCGACGGCT GCGTCGAGGT
3851 GCTGGCCGAC AGCGGCAACC GCCGGCCCAG TACACGACCG CGCGCTAAGG
3901 AGGTAGGTCG AGTTTAGACT CTAGCCATCA CGATGGCCGC AATAAAATAT
3951 CTTTATTTTC ATTACATCTG TGTGTTGGTT TTTTGTGTGA ATCGATAGCG
4001 ATAAGGATCC TCTTTGCGCT TGCGTTTTCC CTTGTCCAGA TAGCCCAGTA
4051 GCTGACATTC ATCCGGGGTC AGCACCGTTT CTGCGGACTG GCTTTCTACG
4101 TAATGGTTTC TTAGACGTCA GGTGGCACTT TTCGGGGAAA TGTGCGCGGA
4151 ACCCCTATTT GTTTATTTTT CTAAATACAT TCAAATATGT ATCCGCTCAT
4201 GAGACAATAA CCCTGATAAA TGCTTCAATA ATATTGAAAA AGGAAGAGTA
4251 TGAGTATTCA ACATTTCCGT GTCGCCCTTA TTCCCTTTTT TGCGGCATTT
4301 TGCCTTCCTG TTTTTGCTCA CCCAGAAACG CTGGTGAAAG TAAAAGATGC
4351 TGAAGATCAG TTGGGTGCAC GAGTGGGTTA CATCGAACTG GATCTCAACA
4401 GCGGTAAGAT CCTTGAGAGT TTTCGCCCCG AAGAACGTTT TCCAATGATG
4451 AGCACTTTCA AAGTTCTGCT ATGTGGCGCG GTATTATCCC GTATTGACGC
4501 CGGGCAAGAG CAACTCGGTC GCCGCATACA CTATTCTCAG AATGACTTGG
4551 TTGAGTACTC ACCAGTCACA GAAAAGCATC TTACGGATGG CATGACAGTA
4601 AGAGAATTAT GCAGTGCTGC CATAACCATG AGTGATAACA CTGCGGCCAA
4651 CTTACTTCTG ACAACTATCG GAGGACCGAA GGAGCTAACC GCTTTTTTGC
4701 ACAACATGGG GGATCATGTA ACTCGCCTTG ATCGTTGGGA ACCGGAGCTG
4751 AATGAAGCCA TACCAAACGA CGAGCGTGAC ACCACGATGC CTGTAGCAAT
4801 GGCAACAACG TTGCGCAAAC TATTAACTGG CGAACTACTT ACTCTAGCTT
4851 CCCGGCAACA ATTAATAGAC TGGATGGAGG CGGATAAAGT TGCAGGACCA
4901 CTTCTGCGCT CGGCCCTTCC GGCTGGCTGG TTTATTGCTG ATAAATCTGG
4951 AGCCGGTGAG CGTGGGTCTC GCGGTATCAT TGCAGCACTG GGGCCAGATG
5001 GTAAGCCCTC CCGTATCGTA GTTATCTACA CGACGGGGAG TCAGGCAACT
5051 ATGGATGAAC GAAATAGACA GATCGCTGAG ATAGGTGCCT CACTGATTAA
5101 GCATTGGTAA TTCGAAATGA CCGACCAAGC GACGCCCAAC CGGTATCAGC
5151 TCACTCAAAG GCGGTAATAC GGTTATCCAC AGAATCAGGG GATAACGCAG
5201 GAAAGAACAT GTGAGCAAAA GGCCAGCAAA AGGCCAGGAA CCGTAAAAAG
5251 GCCGCGTTGC TGGCGTTTTT CCATAGGCTC CGCCCCCCTG ACGAGCATCA
5301 CAAAAATCGA CGCTCAAGTC AGAGGTGGCG AAACCCGACA GGACTATAAA
5351 GATACCAGGC GTTTCCCCCT GGAAGCTCCC TCGTGCGCTC TCCTGTTCCG
5401 ACCCTGCCGC TTACCGGATA CCTGTCCGCC TTTCTCCCTT CGGGAAGCGT
5451 GGCGCTTTCT CATAGCTCAC GCTGTAGGTA TCTCAGTTCG GTGTAGGTCG
5501 TTCGCTCCAA GCTGGGCTGT GTGCACGAAC CCCCCGTTCA GCCCGACCGC
5551 TGCGCCTTAT CCGGTAACTA TCGTCTTGAG TCCAACCCGG TAAGACACGA
5601 CTTATCGCCA CTGGCAGCAG CCACTGGTAA CAGGATTAGC AGAGCGAGGT
5651 ATGTAGGCGG TGCTACAGAG TTCTTGAAGT GGTGGCCTAA CTACGGCTAC
5701 ACTAGAAGGA CAGTATTTGG TATCTGCGCT CTGCTGAAGC CAGTTACCTT
5751 CGGAAAAAGA GTTGGTAGCT CTTGATCCGG CAAACAAACC ACCGCTGGTA
5801 GCGGTGGTTT TTTTGTTTGC AAGCAGCAGA TTACGCGCAG AAAAAAAGGA
5851 TTTCAAGAAG ATCCTTTGAT CTTTTCTACG GGGTCTGACG CTCAGTGGAA
5901 CGAAAACTCA CGTTAAGGGA TTTTGGTCAT GAGATTATCA AAAAGGATCT
5951 TCACCTAGAT CCTTTTATAG TCCGGAAATA CAGGAACGCA CGCTGGATGG
6001 CCCTTCGCTG GGATGGTGAA ACCATGAAAA ATGGCAGCTT CAGTGGATTA
6051 AGTGGGGGTA ATGTGGCCTG TACCCTCTGG TTGCATAGGT ATTCATACGG
6101 TTAAAATTTA TCAGGCGCGA TTGCGGCAGT TTTTCGGGTG GTTTGTTGCC
6151 ATTTTTACCT GTCTGCTGCC GTGATCGCGC TGAACGCGTT TTAGCGGTGC
6201 GTACAATTAA GGGATTATGG TAAATCCACT TACTGTCTGC CCTCGTAGCC
6251 ATCGAGATAA ACCGCAGTAC TCCGGCCACG ATGCGTCCGG CGTAGAGGAT
6301 CGAGATCT
