| 出品公司: | Thermofisher |
|---|---|
| 载体名称: | pSinRep5 |
| 质粒类型: | 哺乳动物细胞载体；辛德毕斯病毒复载体，疫苗载体，基因治疗载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 高拷贝 |
| 克隆方法: | 限制性内切酶，多克隆位点 |
| 启动子: | Subgenomic启动子 |
| 载体大小: | 9.95 kb |
| 5' 测序引物及序列: | -- |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | -- |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | 无 |
| 克隆菌株: | DH5α 等 |
| 宿主细胞（系）: | BHK细胞 |
| 备注: | mRNA疫苗载体，也可以用于基因治疗！ |
| 产品目录号: | K750-01 |
| 稳定性: | 稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 病毒载体 |
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辛德毕斯病毒载体mRNA疫苗载体载体基本信息
辛德毕斯病毒载体mRNA疫苗载体载体图谱质粒图谱和多克隆位点信息
辛德毕斯病毒载体mRNA疫苗载体载体简介
Sindbis表达系统是一个在许多真核细胞系中能产生蛋白质的瞬时表达系统（Schlesinger，1993；Xiong，et al.，1989）。在这个表达系统中，利用Sindbis病毒的生命周期制备重组蛋白。简而言之，你的目的基因被连接到一个特殊设计的质粒载体（pSinRep5），在Sindbis亚基因组启动子的控制下。这种DNA结构随后被用于在体外制备基因组长度的RNA转录物（重组RNA）。一旦这些封顶多聚腺苷酸化RNA转录物通过转染进入细胞浆，RNA作为信使RNA被翻译，产生复制酶。这些复制酶同时在胞质中合成基因组和亚基因组的RNA分子。正常情况下，亚基因组RNA会编码RNA包装和病毒组装所需的蛋白质；然而，这些将被替换为为表达的目的基因。亚基因组RNA的表达量最大在转染的细胞中有丰富的信息，并能迅速吸收宿主的大部分信息翻译机器自身使用，产生高水平的所需蛋白质（Liljeström和Garoff，1991年；Strauss和Strauss，1994年）。
pSinRep5是一种9951bp的载体，用于产生重组RNA分子，用于真核细胞系的转染或感染。它含有非结构性的辛德比斯病毒蛋白质基因1-4（nsP1-4）在体内复制RNA转录物亚基因组转录和多克隆位点。多克隆位点（XbaⅠ，Mlu I、Pml I、Sph I、Stu I和Apa I）允许将您感兴趣的基因插入在BHK细胞或所选细胞系中表达的亚基因组启动子。三个独特的限制性位点（XhoⅠ、NotⅠ和PacⅠ）位于多克隆位点的3′端体外转录前质粒的线性化。重组RNA利用SP6启动子合成转录物并转染BHK细胞。
SINV疫苗载体既有效又安全,这使其开发应用越来越广泛，目前SINV疫苗载体的研发已经较成熟,Saxena等[20]用SINV疫苗载体表达狂犬病毒包膜糖蛋白,得到以SINV复制子为基础的狂犬DNA疫苗( PAlpha- Rab-C)并将其与传统的狂犬DNA疫苗以及商品化的细胞培养疫苗(Rabipur)共同免疫小鼠,结果发现PAlpha-Rab-G优于传统的狂犬DNA疫苗,与Rabipur具有相似的免疫性与保护性,这提示SINV载体作为疫苗载体比其它病毒作为载体更具优势。Alejandra等[21用SINV DNA疫苗载体分别表达麻疹病毒血凝素(PMSIN-H)以及血凝素和融合糖蛋白的结合体,并用其免疫乳鼠,发现前者可诱发鼠体产生持续性、高活性麻疹病毒中和抗体IgG2a,后者诱发产生的中和抗体滴度超过200 mIU/mL但持续时间短暂且抗体缺乏亲和力,二者都能激发机体Th1介导的细胞免疫,这种基于SINV疫苗载体的麻疹DNA疫苗是--种既有效又安全的疫苗,可用于儿童麻疹的预防免疫。Steven 等[9]用质粒型.SINV载体表达结核杆菌抗原85B( Sin85B),用其免疫小鼠并用卡介苗( BCG)免疫小鼠作为对照,结果发现Sin85B与BCG具有相似的免疫保护性。Mill-er等[2用表达流感病毒血凝素的SINV质粒型复制子载体( pSIN-HA)作为免疫原免疫小鼠,较少剂量的pSIN-HA就可以显著降低鼠肺流感病毒滴度,激发长期记忆性免疫应答,这表明质粒型SINV载体可作为高效的疫苗载体，可使机体得到持续性免疫保护。近年来,在对HIV的研究中SINV载体也发挥着重要的作用23)。目前,SINV疫苗载体发展越来越成孰.应用越来越广泛，
